Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-CD64 para WB, ELISA - P12314

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do CD64

• O CD64, também conhecido como FcγRI, é o receptor de alta afinidade para a região Fc da imunoglobulina gama (IgG). É codificado pelo gene FCGR1A em humanos e pertence à superfamília das imunoglobulinas.
• Este receptor desempenha um papel crítico na ligação entre a imunidade humoral e celular, ao se ligar à IgG com alta afinidade, permitindo que monócitos e macrófagos reconheçam e eliminem alvos opsonizados por IgG.
• O CD64 media funções efetoras potentes, incluindo a citotoxicidade celular dependente de anticorpos (ADCC) contra células infectadas por vírus, contribuindo assim para as respostas imunes antivirais.
• A proteína é composta por três domínios extracelulares semelhantes a imunoglobulinas, uma única hélice transmembrana e uma cauda citoplasmática curta. O imunogênio utilizado corresponde à região extracelular (aminoácidos 16–288), cobrindo os domínios de ligação à IgG.
• O CD64 é expresso especificamente na superfície de monócitos e macrófagos, consistente com seu papel na vigilância imune inata e na apresentação de antígenos.
• Modificações pós-traducionais incluem glicosilação N-ligada e fosforilação. A faixa de peso molecular observada (45–75 kDa) reflete a heterogeneidade da glicosilação.
• O splicing alternativo gera múltiplas isoformas, algumas das quais podem ser secretadas ou funcionar como receptores solúveis.
• Como um receptor imune inato chave e um gatilho para ADCC, o CD64 é um biomarcador validado para a ativação de monócitos/macrófagos e um alvo terapêutico na imunoterapia do câncer.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunogênio é uma proteína recombinante que abrange todo o domínio extracelular (aa 16–288), sugerindo que este anticorpo provavelmente reconhece a conformação nativa, bem como epítopos desnaturados. Para Western blot, o padrão de bandas observado pode aparecer como uma banda larga ou múltiplas bandas entre 45 e 75 kDa devido à glicosilação variável; use carga proteica adequada e condições redutoras.
• Para ELISA, considere usar proteína FcγRI recombinante ou lisados de células de linhagens celulares monocíticas humanas (por exemplo, THP-1) como fonte de antígeno. Valide a especificidade do ensaio com controles de isotipo e bloqueio com excesso de IgG humana.
• Como a expressão de CD64 é restrita a monócitos/macrófagos, certifique-se de que amostras de tecido ou células sejam enriquecidas para essa população para obter sinais robustos. Em preparações leucocitárias mistas, a coloração conjunta com CD14 pode ajudar a confirmar a identidade dos monócitos.
• Espera-se que o anticorpo tenha reatividade cruzada com o CD64 humano, mas não com outros receptores Fcγ (CD32, CD16). Se for necessária uma reatividade mais ampla, teste contra proteínas recombinantes de diferentes membros da família FcγR.
• Dado seu papel na ADCC, este anticorpo pode ser útil em ensaios funcionais que monitoram a morte celular mediada por monócitos; no entanto, suas propriedades bloqueadoras ou ativadoras devem ser determinadas experimentalmente.

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