Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-CD68 para WB, IF-P, IHC-P, ELISA - P34810

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do CD68

• O CD68, também conhecido como macrosialina, GP110, LAMP4 ou SCARD1, é uma proteína transmembranar do tipo I fortemente glicosilada pertencente à família das glicoproteínas de membrana associadas a lisossomas/endossomas (LAMP). Contém um domínio tipo mucina e uma hélice transmembranar.
• O splicing alternativo do gene CD68 gera múltiplas isoformas, que podem contribuir para a diversidade funcional em diferentes tipos de células ou compartimentos celulares.
• O CD68 desempenha um papel fundamental nas atividades fagocíticas dos macrófagos teciduais, participando tanto no metabolismo lisossomal intracelular como nas interações extracelulares célula-célula e célula-patógeno. Liga-se a lectinas ou selectinas específicas de tecidos e órgãos, facilitando assim a homing de subconjuntos de macrófagos para locais específicos.
• A proteína sofre reciclagem rápida entre endossomas, lisossomas e a membrana celular, um processo dinâmico que pode permitir que os macrófagos rastejem sobre substratos portadores de selectinas ou outras células.
• A nível subcelular, o CD68 localiza-se principalmente na membrana celular, na membrana do endossoma e na membrana do lisossoma, consistente com os seus papéis no tráfego vesicular e na adesão superficial.
• O CD68 é altamente expresso em monócitos sanguíneos e macrófagos teciduais. Também é encontrado, em menor extensão, em linfócitos, fibroblastos, células endoteliais e numerosas linhagens celulares tumorais. Em tumores, a expressão de CD68 pode promover a adesão mediada por selectinas ao endotélio vascular, potencialmente auxiliando a disseminação metastática.
• As modificações pós-traducionais incluem glicosilação extensa N- e O-ligada, o que explica o peso molecular aparente da proteína ser superior aos 37 kDa previstos em SDS-PAGE. A proteína também contém ligações dissulfeto e um peptídeo sinal.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunogénio utilizado é um peptídeo sintético (aa 100‑200 do CD68 humano), sugerindo que o anticorpo reconhece um epítopo linear. Para western blotting, as condições padrão de redução e desnaturação devem ser adequadas; no entanto, devido à forte glicosilação, a banda observada pode migrar acima dos 37 kDa previstos. Considere o uso de enzimas de desglicosilação para confirmar a especificidade, se necessário.
• Para imunofluorescência em secções incluídas em parafina (IF‑P) e imuno-histoquímica (IHC‑P), a recuperação de antigénio é recomendada porque o CD68 é uma proteína de membrana frequentemente localizada em compartimentos intracelulares. Otimize a fixação (por exemplo, 4% PFA ou formol) e a permeabilização para garantir o acesso ao epítopo em endossomas/lisossomas.
• Ao utilizar este anticorpo em ELISA, valide o desempenho contra a proteína CD68 recombinante ou lisados de linhagens celulares expressoras de CD68 (por exemplo, monócitos/macrófagos THP‑1) para confirmar a sensibilidade e especificidade.
• Como o CD68 é um marcador de macrófagos, inclua controlos positivos apropriados (por exemplo, lisados de macrófagos humanos) e negativos (por exemplo, amostras CD68‑knockout ou controlos de isótipo) em todos os experimentos para verificar a especificidade do alvo.

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