Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-CD73/NT5E para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P21589

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do CD73/NT5E

• O CD73/NT5E codifica a ecto-5'-nucleotidase, uma proteína de membrana ancorada por glicosilfosfatidilinositol (GPI) que catalisa a hidrólise de nucleotídeos monofosfato extracelulares em seus nucleosídeos correspondentes e fosfato inorgânico.
• Catalisa a hidrólise de AMP em adenosina e fosfato inorgânico, com preferência por monofosfatos de ribonucleotídeos em relação às formas de desoxirribose (PubMed:21933152, PubMed:22997138, PubMed:23142347, PubMed:34403084). Referências relacionadas:
• PMID:21933152
• PMID:22997138
• PMID:23142347
• PMID:34403084
• Exibe ampla especificidade de substrato, incluindo IMP, UMP, GMP, CMP, dAMP, dCMP, dTMP, NAD e NMN (PubMed:21933152, PubMed:22997138, PubMed:23142347). Referências relacionadas:
• PMID:21933152
• PMID:22997138
• PMID:23142347
• Localizado na membrana celular via uma âncora GPI C-terminal, posicionando o sítio ativo extracelularmente para regular a sinalização purinérgica e as respostas imunes.
• Requer zinco como cofator para a atividade catalítica; a enzima contém um centro de zinco binuclear essencial para a hidrólise do fosfato.
• Modificações pós-traducionais incluem glicosilação ligada a N e formação de ligações dissulfeto, contribuindo para a estabilidade e função da proteína.
• Variantes genéticas no NT5E estão associadas à calcificação arterial devido à deficiência de CD73 (ACDC), uma doença autossômica recessiva rara.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde aos resíduos 27–377 do NT5E humano, que abrange a maior parte do domínio extracelular; este projeto favorece a detecção do CD73 de superfície celular em sua conformação nativa.
• Para Western blotting (WB), considere uma faixa de diluição de 1:500–1:2000, e esteja ciente de que o peso molecular previsto é de ~63 kDa; em condições redutoras, formas glicosiladas podem aparecer ligeiramente mais altas.
• Para imunohistoquímica (IHC-P) e imunofluorescência (IF/ICC), a recuperação antigênica com tampão citrato (pH 6.0) é frequentemente benéfica; valide em um painel de tecidos de controle positivo e negativo.
• A reatividade cruzada com camundongo e rato foi demonstrada, mas dadas as variações de sequência específicas da espécie, as diluições ideais de trabalho devem ser determinadas empiricamente para cada ensaio.
• Como um anticorpo policlonal, a consistência de lote para lote pode variar; recomendamos titular cada novo lote e incluir controles positivos e negativos apropriados em todos os experimentos.
• Para ELISA, o revestimento direto da proteína recombinante ou formatos de captura-detecção podem ser testados; realize titulações em tabuleiro para otimizar a relação sinal-ruído.

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