Anticorpo Policlonais Anti-CD8A para WB, IHC-P, ELISA - P01732

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da CD8A

• O gene CD8A codifica a cadeia alfa da glicoproteína CD8 de superfície de linfócitos T, também conhecida como T8/Leu-2, que é um coreceptor para moléculas MHC de classe I. A proteína CD8 existe como um heterodímero ligado por pontes dissulfeto entre as cadeias alfa/CD8A e beta/CD8B, ou menos comumente como um homodímero de CD8A.
• CD8A é essencial para a resposta imune. Em linfócitos T, interage com o receptor de linfócitos T (TCR) e os complexos peptídeo:MHC de classe I nas células apresentadoras de antígeno, recrutando a quinase Src LCK para iniciar vias de sinalização que levam à ativação, proliferação e diferenciação dos linfócitos T em linfócitos T citotóxicos (CTLs).
• CD8A permite que os CTLs reconheçam e eliminem células infectadas e tumorais. A cascata de sinalização intracelular desencadeada pela fosforilação CD8A-LCK promove a produção de linfocinas, motilidade, adesão e lise das células alvo.
• Em células NK (natural killer), os homodímeros de CD8A fornecem um mecanismo de sobrevivência que facilita a conjugação e lise de múltiplas células alvo. Os homodímeros de CD8A também suportam a sobrevivência e diferenciação de linfócitos ativados em linfócitos T de memória CD8+.
• CD8A é expressa em linfócitos T derivados do timo, em um subconjunto de células NK, linfócitos T de memória, linfócitos intraepiteliais, monócitos e células dendríticas. Sua expressão pode ser induzida em células dendríticas plasmocitóides após estimulação pelo vírus herpes simplex tipo 1.
• A proteína é uma glicoproteína de membrana integral com um domínio transmembrana de passagem única e uma forma secretada produzida por splicing alternativo. Contém um domínio do tipo imunoglobulina e é modificada por pontes dissulfeto, palmitoilação e glicosilação N-ligada.
• As palavras-chave associadas a CD8A incluem imunidade adaptativa, splicing alternativo, membrana celular, variante de doença (que a implica em imunodeficiência), ponte dissulfeto, glicoproteína, domínio de imunoglobulina, lipoproteína, palmitato, secretada e hélice transmembrana.
• O peso molecular da proteína madura é de aproximadamente 25,7 kDa, consistente com o tamanho da banda observada de 26 kDa em condições redutoras na análise de Western blot.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno usado para gerar este anticorpo policlonal corresponde aos aminoácidos 22-182 da CD8A humana, que abrange o domínio extracelular do tipo imunoglobulina. É muito provável que esta região esteja acessível na superfície celular, tornando o anticorpo adequado para aplicações que reconhecem a proteína nativa.
• Para Western blot (WB), é esperada uma banda em torno de 26 kDa. O anticorpo pode detectar tanto as formas glicosiladas quanto não glicosiladas. Recomendam-se condições redutoras para resolver o monômero.
• Para imuno-histoquímica em cortes embebidos em parafina (IHC-P), as condições ideais de recuperação de antígeno (por exemplo, tampão de citrato, pH 6,0) devem ser determinadas empiricamente. A natureza policlonal pode fornecer amplificação forte do sinal, mas também pode aumentar o fundo; as etapas de bloqueio devem ser otimizadas.
• Como anticorpo policlonal, ele reconhece múltiplos epítopos, o que pode ser vantajoso para ensaios de ELISA, podendo servir tanto como reagente de captura quanto de detecção. A crossadsorção contra proteínas de camundongo garante a reatividade com a CD8A de camundongo, expandindo sua utilidade em estudos com modelos murinos.

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