PolymAb® Anti-CDK4 de Coelho para WB, IP, IF/ICC, IF-P, IHC-P, ELISA - P11802

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do CDK4

• CDK4 (Cinase 4 dependente de ciclina), também conhecida como Cinase 4 da divisão celular ou PSK-J3, é uma serina/treonina proteína cinase codificada pelo gene CDK4 em humanos.
• Como subunidade catalítica dos complexos ciclina D-CDK4, a CDK4 fosforila e inibe membros da família da proteína retinoblastoma (RB), notavelmente RB1, durante a transição G1/S do ciclo celular.
• A fosforilação de RB1 pela CDK4 libera os fatores de transcrição E2F, permitindo a transcrição dos genes necessários para a entrada na fase S e a progressão do ciclo celular.
• A CDK4 também fosforila o SMAD3 de maneira dependente do ciclo celular, reprimindo sua atividade transcripcional e integrando sinais mitogênicos e antimitogênicos.
• A localização subcelular inclui citoplasma, núcleo e membrana nuclear; a translocação para o núcleo é facilitada pelo complexo ternário ciclina D/CDK4/CDKN1B.
• Palavras-chave da UniProt destacam seus papéis na ligação ao ATP, ciclo celular, divisão celular e sua regulação por acetilação e fosforilação; variantes da doença estão ligadas ao câncer.
• O peso molecular previsto é de aproximadamente 34 kDa (UniProt: 33,7 kDa), e o splicing alternativo pode gerar isoformas adicionais.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo sintético correspondente aos aminoácidos 204-303 do CDK4 humano. Certifique-se de que o epítopo alvo está acessível no formato do seu ensaio; condições desnaturantes e redutoras podem ser necessárias para Western blotting.
• Para Western blot (WB), uma banda em torno de 34 kDa é esperada em lisados de linhagens celulares humanas, de camundongo ou de rato; confirme a especificidade da banda usando controles positivos e negativos apropriados.
• Na imunoprecipitação (IP), otimize as proporções anticorpo:lisado e inclua um anticorpo de controle relevante para avaliar a eficiência de captura.
• Para imunofluorescência (IF/ICC) e imuno-histoquímica (IHC-P), valide os padrões de coloração contra as distribuições subcelulares conhecidas do CDK4 (nuclear e citoplasmática) em células em proliferação.
• Aplicações em ELISA podem exigir o pareamento com um anticorpo de detecção adequado e curvas padrão usando proteína CDK4 recombinante.
• Sempre realize experimentos preliminares de titulação para determinar as concentrações de trabalho ideais para suas amostras e protocolos específicos.

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