Anticorpo Policlonal Anti-CFI para WB e ELISA - P05156

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do CFI

• O CFI é uma serina protease do tipo tripsina que regula negativamente todas as vias do complemento clivando as cadeias alfa da C3b e C4b, inativando assim estas opsoninas-chave.
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• Requer cofatores para a sua atividade, incluindo o fator H e C4BP na fase fluida, e a proteína cofatora de membrana (CD46) e o recetor de complemento 1 (CR1) nas superfícies celulares.
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• Em células hospedeiras saudáveis, a degradação mediada pelo CFI da C3b depositada impede a ativação autóloga do complemento, enquanto em células apoptóticas ou micróbios que carecem de cofatores protetores, a C3b permanece ativa para promover a opsonização e a depuração.
  Referências relacionadas: PMID:28671664
• O CFI é expresso principalmente no fígado pelos hepatócitos, mas também é encontrado em monócitos, fibroblastos e queratinócitos.
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• A proteína é secretada para o espaço extracelular e circula no sangue, exercendo a sua função reguladora na fase fluida e nas superfícies celulares.
• O CFI contém ligações dissulfureto, locais de glicosilação e motivos de ligação ao cálcio; está classificado entre as serina proteases e está envolvido na imunidade inata. Mutações estão associadas à degeneração macular relacionada à idade e à síndrome hemolítico-urémica.
• A proteína tem uma massa molecular prevista de ~66 kDa e sofre glicosilação N-ligada.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunogénio (aa 19-300) abrange a porção N-terminal do CFI humano, provavelmente reconhecendo tanto o pró-CFI como a cadeia pesada madura; considere isto ao interpretar os padrões de bandas.
• Para Western blot, a diluição inicial recomendada é tipicamente 1:500–1:2000; deve ser observada uma banda esperada perto de 66 kDa em condições redutoras, com possíveis bandas adicionais provenientes de glicosilação ou processamento.
• Para ELISA, as condições de teste requerem otimização; o anticorpo pode ser usado para captura ou deteção de antigénio, mas valide o emparelhamento com um anticorpo complementar se usar um formato sanduíche.
• Ao analisar amostras de rato, verifique a reatividade; embora a reatividade cruzada esteja listada, a intensidade do sinal pode diferir do CFI humano.
• Inclua sempre controlos positivos e negativos apropriados, tais como lisados de células que expressam CFI (por exemplo, linhas celulares derivadas de hepatócitos) e soro esgotado de CFI.

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