Anticorpo policlonal anti-Chk1 para WB, ELISA - O14757

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização da Chk1

• A Chk1 (quinase 1 do ponto de controlo) é uma serina/treonina-proteína quinase e membro da superfamília das proteínas quinases, com um domínio quinase conservado e um local de ligação ao ATP.
• É necessária para a paragem do ciclo celular mediada pelo ponto de controlo e para a ativação da reparação do DNA em resposta a danos no DNA ou a DNA não replicado, reconhecendo a sequência consenso do substrato [R-X-X-S/T]. Referências relacionadas: PMID:11535615 PMID:12399544 PMID:12446774
• A Chk1 fosforila as fosfatases CDC25 (CDC25A, CDC25B, CDC25C), criando locais de ligação para 14-3-3 e promovendo a proteólise de CDC25A, inibindo assim os complexos CDK-ciclina e bloqueando a progressão do ciclo celular. Referências relacionadas: PMID:12676583 PMID:12676925 PMID:12759351 PMID:9278511 PMID:19734889 PMID:20090422
• A fosforilação de TP53 em múltiplos locais C-terminais pela Chk1 promove a sua acetilação e ativação, levando à paragem do ciclo celular e à supressão da proliferação. Referências relacionadas: PMID:10673501 PMID:15659650 PMID:16511572
• A Chk1 desempenha funções diretas na reparação do DNA ao fosforilar RAD51 na Thr-309 (aumentando a recombinação homóloga), FANCE (facilitando a reparação de ligações cruzadas no DNA) e ao regular a manutenção da forquilha de replicação através de PCNA. Referências relacionadas: PMID:15665856 PMID:17296736 PMID:18451105
• A Chk1 modula a cromatina através da fosforilação de TLK1 na Ser-743, impedindo a fosforilação de ASF1A e potencialmente aumentando a montagem da cromatina, e através da fosforilação da histona H3.1 na Thr11 para regular a transcrição génica. Referências relacionadas: PMID:12660173 PMID:12955071
• Uma isoforma de CHEK1 resultante de splicing alternativo atua como um repressor endógeno da Chk1 de comprimento total, promovendo a transição da fase S para G2/M através de interação direta e antagonismo.
• A Chk1 localiza-se no núcleo, nos cromossomas, no citoplasma e nos centrossomas. É expressa ubiquamente, com níveis mais elevados no timo, testículos, intestino delgado e cólon.

Orientações experimentais e sugestões técnicas

• Para Western blotting, utilize condições redutoras e prepare lisados a partir de células ou tecidos conhecidos por expressarem Chk1, como o timo ou os testículos. O peso molecular previsto é de ~54 kDa; no entanto, modificações pós-traducionais podem causar alterações na migração aparente.
• O imunogénio corresponde aos aminoácidos 148-307 da Chk1 humana, situados no domínio quinase. Embora esta região seja altamente conservada na isoforma canónica, recomenda-se a validação com controlos adequados para avaliar a reatividade com potenciais isoformas alternativas.
• Este anticorpo policlonal de coelho está validado para ELISA e WB. Para aplicações de ELISA, considere utilizar proteína Chk1 recombinante ou um fragmento como padrão e otimize a diluição do anticorpo e as condições de bloqueio para o formato específico do seu ensaio.
• Como se trata de um anticorpo policlonal, é possível haver variabilidade entre lotes. Recomendamos validar o desempenho no seu sistema experimental e incluir controlos positivos e negativos adequados.

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