Anticorpo Monoclonal Coelho Anti-Chk1 para WB, IHC-P, ELISA - O14757

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Chk1

• Codificada pelo gene CHEK1, a serina/treonina-proteína quinase Chk1 sofre splicing alternativo para produzir múltiplas isoformas, incluindo uma isoforma repressora endógena que antagoniza a Chk1 de comprimento total para promover a transição da fase S para G2/M.
• Funciona como uma quinase de ponto de verificação crítica, necessária para a parada do ciclo celular e ativação do reparo do DNA em resposta a danos no DNA ou DNA não replicado, através do reconhecimento da sequência consenso do substrato [R-X-X-S/T]. Referências relacionadas: PMID:11535615 PMID:12399544 PMID:12446774
• Fosforila CDC25A, CDC25B e CDC25C, criando sítios de ligação para 14-3-3 ou preparando-os para poliubiquitinação e degradação mediada por NEK11, inibindo assim os complexos CDK-ciclina e bloqueando a progressão do ciclo celular. Referências relacionadas: PMID:12676583 PMID:12676925 PMID:12759351 PMID:9278511 PMID:19734889 PMID:20090422
• Melhora o reparo do DNA por recombinação homóloga através da fosforilação de RAD51 em Thr-309, promovendo a liberação de RAD51 de BRCA2 e aumentando sua associação à cromatina. Referências relacionadas: PMID:15665856
• Fosforila o C-terminal de TP53, aumentando sua acetilação e atividade transcricional para promover a parada do ciclo celular e suprimir a proliferação. Referências relacionadas: PMID:10673501 PMID:15659650 PMID:16511572
• Modula a estrutura da cromatina e a expressão gênica fosforilando a histona H3.1 em Thr-11 (H3T11ph), levando ao silenciamento epigenético de um subconjunto de genes (Por similaridade).
• Localiza-se no núcleo, cromossomos, citoplasma e centrossomo, refletindo seus papéis multifacetados no controle do ciclo celular e manutenção genômica.
• Expressa de forma ubíqua com níveis mais altos no timo, testículo, intestino delgado e cólon, tecidos com altas taxas de proliferação.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno abrange os aminoácidos 1-100 no N-terminal; considere confirmar a especificidade do epítopo via competição com peptídeo ou mutantes de deleção em seu sistema de ensaio.
• Para Western blotting, o peso molecular esperado é ~54kDa; use um gel de SDS-PAGE a 10% e otimize as condições de transferência para detecção de alto peso molecular.
• Na imuno-histoquímica (parafina), pode ser necessário o recuperação antigênica com tampão citrato (pH 6.0); inclua timo ou testículo como tecidos de controle positivo e IgG de coelho isotípico como controle negativo.
• Para ELISA, os formatos direto ou sanduíche podem ser avaliados; considere ensaios competitivos com o peptídeo imunizante para validar a especificidade de ligação.
• Este anticorpo é validado para reatividade humana; a reatividade cruzada com outras espécies não foi determinada, portanto, a validação específica da espécie é recomendada se for estender para outros modelos.

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