Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-Caspase-8 Clivada (Asp384) para WB, ELISA - Q14790

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Caspase-8

• A Caspase-8 é uma tiol protease que atua como interruptor molecular para apoptose, necroptose e piroptose, sendo essencial para evitar danos teciduais durante o desenvolvimento e na vida adulta. Referências relacionadas: PMID:23516580 PMID:35338844 PMID:35446120
• Como caspase iniciadora, ela medeia a apoptose extrínseca ao formar o complexo de sinalização indutor de morte (DISC) após ativação de FAS/CD95 ou TNFRSF1A, levando à clivagem e ativação das caspases efetoras CASP3, CASP6, CASP7 e outras. Referências relacionadas: PMID:8681376 PMID:8681377 PMID:9184224 PMID:8962078 PMID:9006941 PMID:16916640
• Existem várias isoformas: a isoforma 1 (comprimento total), a isoforma 5 e a isoforma 7 são amplamente expressas; as isoformas que não possuem o sítio catalítico atuam como inibidores da cascata de caspases. Referências relacionadas: PMID:12010809
• A proteína se localiza no citoplasma, núcleo e projeções celulares como lamellipodia, e sofre fosforilação em Tyr-380 para promover a migração celular independentemente da atividade proteásica. Referências relacionadas: PMID:18216014 PMID:27109099
• A Caspase-8 regula negativamente a necroptose ao clivar RIPK1 em Asp-324, limitando a atividade quinase e as respostas inflamatórias. Referências relacionadas: PMID:31827280 PMID:31827281
• Ela também inicia a piroptose ao clivar gasdermina-C e gasdermina-D, e participa da imunidade inata ao inativar N4BP1 a jusante de TLR3/4. Referências relacionadas: PMID:32929201 PMID:34012073
• A maior expressão é observada em leucócitos do sangue periférico, baço, timo e fígado, com níveis mais baixos em cérebro, testículo e músculo esquelético.
• Palavras-chave incluem: splicing alternativo, zimogênio, tiol protease, variante de doença e interação hospedeiro-vírus.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde aos aminoácidos 371–470 da Caspase-8 humana (NP_203519.1), que abrange a região da subunidade grande após a autoclivagem em Asp384; portanto, o anticorpo é específico para a forma clivada e ativada.
• Para Western blot, o pró-enzima migra a aproximadamente 55 kDa, enquanto a subunidade grande clivada geralmente aparece em torno de 43–45 kDa. Recomenda-se a inclusão de controles positivos e negativos apropriados (ex.: células tratadas com indutores de apoptose) para verificar a identidade da banda.
• A otimização do ELISA pode exigir a titulação da concentração do anticorpo e a seleção cuidadosa de agentes de bloqueio para reduzir o fundo; considere usar a proteína recombinante de Caspase-8 ou peptídeo como padrão.
• A reatividade cruzada com outras espécies não foi determinada; valide no sistema de amostra relevante se aplicações não humanas forem planejadas.

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