Anticorpo monoclonal de coelho anti-Gasdermina D não clivada (terminal N) para pesquisa de piroptose - P57764

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização da Gasdermina D

• Precursora de uma proteína formadora de poros que, após a clivagem por caspases inflamatórias, libera um fragmento N-terminal que se liga às membranas e forma poros, desencadeando a piroptose. Referências relacionadas: PMID:26375003 PMID:26375259 PMID:27281216
• Promove a piroptose em resposta a infecções microbianas e sinais de perigo; é clivada por CASP1, CASP4 ou CASP5; transloca-se para a membrana plasmática, liga-se aos lipídios do folheto interno e forma poros de 10–15 nm, permitindo a liberação de IL1B, IL18 e CASP7 maduras. Referências relacionadas: PMID:26375003 PMID:26375259 PMID:27418190 PMID:27281216 PMID:29898893 PMID:36227980 PMID:33472215 PMID:37198476
• Medeia a ativação não canônica do inflamassoma em resposta ao LPS citosólico; também forma poros nas membranas mitocondriais, liberando mtDNA, e os fragmentos N-terminais extracelulares matam diretamente bactérias por meio de sua especificidade de ligação a lipídios. Referências relacionadas: PMID:27281216
• Atua como coativadora transcricional no intestino delgado após a clivagem por CASP3/CASP7; transloca-se para o núcleo, coativa STAT1 para induzir CIITA e MHC de classe II, promovendo a tolerância alimentar mediada por células Tr1.
• É clivada pelo alérgeno papaína, levando à formação de poros na membrana plasmática e à liberação específica de IL33, desencadeando uma resposta inflamatória do tipo 2. Referências relacionadas: PMID:35794369
• É expressa nas células suprabasais do esôfago e no istmo/colo, fossetas e glândulas do estômago, indicando expressão preferencial em células em diferenciação.
• A localização subcelular inclui citoplasma, citosol, inflamassoma, membrana celular, compartimento secretado, membrana mitocondrial e núcleo; as modificações pós-traducionais incluem palmitoilação, fosforilação e ubiquitinação.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno abrange o sítio de clivagem Asp275; portanto, espera-se que o anticorpo reconheça seletivamente o fragmento N-terminal clivado, em vez da GSDMD de comprimento total. Confirme a especificidade usando controles positivos e negativos apropriados.
• Para Western blot, processe as amostras em condições redutoras e procure uma banda em torno de 30 kDa (fragmento N-terminal). Valide utilizando lisados de células submetidas à piroptose (por exemplo, tratamento com LPS+ATP).
• Na imunofluorescência/ICC, otimize as condições de fixação e permeabilização. O fragmento N-terminal pode localizar-se na membrana plasmática ou nas mitocôndrias de células em piroptose.
• Para aplicações em ELISA, considere combinações em sanduíche com um anticorpo de captura direcionado a um epítopo diferente. Valide o desempenho utilizando proteínas GSDMD recombinantes ou material derivado de células.

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