Anticorpo Monoclonal Anti-PARP Clivado (Asp214) para WB, IF/ICC, ELISA - P09874

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da PARP1

• A PARP1 é uma poli-ADP-ribosiltransferase nuclear que media a poli-ADP-ribosilação de proteínas substrato, desempenhando um papel central no reparo de DNA, remodelação da cromatina e estabilidade do genoma (PubMed:17177976, PubMed:18055453, PubMed:18172500). Referências relacionadas: PMID:17177976 PMID:18055453 PMID:18172500
• Ela catalisa a ADP-ribosilação ligada a serina, glutamato e tirosina, com especificidade de resíduo determinada pelos cofatores HPF1 e NMNAT1 (PubMed:28190768, PubMed:32028527, PubMed:29954836). Referências relacionadas: PMID:28190768 PMID:32028527 PMID:29954836
• No reparo de DNA, a PARP1 detecta quebras na fita, recruta fatores de reparo e promove o relaxamento da cromatina para facilitar o reparo por excisão de base e por quebra de fita dupla (PubMed:26344098, PubMed:30356214, PubMed:19344625). Referências relacionadas: PMID:26344098 PMID:30356214 PMID:19344625
• Durante a apoptose, a PARP1 é clivada pela caspase-3 e -7 em Asp214, gerando um grande fragmento catalítico (∼89 kDa) que se transloca para o citoplasma e serve como um carreador de poli-ADP-ribose, desencadeando a apoptose mediada por AIFM1 (PubMed:33168626). Referências relacionadas: PMID:33168626
• A localização subcelular é predominantemente nuclear e nucleolar em condições normais; após a clivagem, o fragmento catalítico se realoca para o citoplasma.
• A PARP1 sofre extensas modificações pós-traducionais, incluindo acetilação, ADP-ribosilação (automodificação), fosforilação e ubiquitinação, que regulam sua atividade e interações.
• Além do reparo de DNA, a PARP1 funciona na regulação da transcrição, progressão do garfo de replicação, adipogênese e imunidade inata, modulando as atividades das proteínas e a estrutura da cromatina (PubMed:15607977, PubMed:22464733, PubMed:35460603). Referências relacionadas: PMID:15607977 PMID:22464733 PMID:35460603

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Este anticorpo tem como alvo o neoepítopo em Asp214; portanto, detecta especificamente o fragmento de PARP clivado, e não a PARP de comprimento total. Para western blot, trate as células com indutores de apoptose (por exemplo, estaurosporina ou etoposídeo) para enriquecer o fragmento de ∼89 kDa.
• Para imunofluorescência/ICC, considere a fixação após a indução da apoptose para observar a localização citosólica do fragmento clivado. Valide a especificidade da coloração em seu sistema experimental com controles apropriados.
• A adequação para ELISA foi relatada; ao projetar ensaios, considere usar o fragmento de PARP clivado recombinante ou um peptídeo como padrão e otimize as condições de revestimento e detecção.

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