Anticorpo Policlonal Anti-CLOCK de Coelho para WB, ELISA - O15516

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do CLOCK

• CLOCK (Circadian Locomotor Output Cycles Protein Kaput), também conhecido como bHLHe8, é um componente central do relógio circadiano molecular que impulsiona ritmos de aproximadamente 24 horas na expressão gênica, metabolismo e comportamento (UniProt O15516).
• Como o membro positivo do ciclo de retroalimentação transcrição/tradução, o CLOCK forma um heterodímero com o BMAL1 (ou BMAL2) para se ligar a elementos E-box (5'-CACGTG-3') nos promotores dos genes centrais do relógio (PER1/2/3, CRY1/2) e genes controlados pelo relógio, ativando assim a transcrição.
• O heterodímero CLOCK-BMAL1 reconhece preferencialmente o motivo 5'-CACGTGA-3', onde o CLOCK se liga ao sítio metade 5'-CAC-3' e o BMAL1 se liga ao sítio metade 5'-GTGA-3'; motivos não canônicos 5'-AACGTGA-3' e 5'-CATGTGA-3' também são reconhecidos. Referências relacionadas: PMID:23229515
• O CLOCK possui atividade intrínseca de histona acetiltransferase, permitindo a remodelação cromatínica circadiana pela acetilação de histonas (ex.: H3, H4) e proteínas não histonas, incluindo o próprio BMAL1; esta atividade é tão crítica quanto a transcrição para a geração do ritmo.
• Ele acetila a argininosuccinato sintase 1 (ASS1) de maneira circadiana, levando à inibição da atividade enzimática e ao controle rítmico da biossíntese de arginina e da ureogênese, ligando assim o relógio ao metabolismo. Referências relacionadas: PMID:28985504
• O CLOCK reprime a atividade transcricional do receptor de glicocorticoides NR3C1/GR acetilando múltiplos resíduos de lisina na região da dobradiça do receptor, reduzindo sua associação com elementos de resposta a glicocorticoides. Referências relacionadas: PMID:21980503
• Subcelularmente, o CLOCK é principalmente nuclear, mas também detectado no citoplasma e citosol. É amplamente expresso, com níveis mais altos no testículo e músculo esquelético, e é altamente enriquecido no núcleo supraquiasmático (SCN) do cérebro, o relógio central.
• Modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação, acetilação e ubiquitinação, ajustam finamente a estabilidade e a atividade do CLOCK, contribuindo para o controle oscilatório preciso dos ritmos circadianos.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde aos aminoácidos 450-600 do CLOCK humano, uma região que pode garantir o reconhecimento do domínio acetiltransferase e ajudar a detectar tanto a isoforma de comprimento total quanto possíveis isoformas; considere verificar a reatividade na espécie e tecido relevantes.
• Para Western blot, o peso molecular previsto do CLOCK é de 95 kDa; no entanto, modificações pós-traducionais (ex.: fosforilação, acetilação) podem deslocar a banda observada. Use tampões de bloqueio e detecção apropriados, otimizados para anticorpos policlonais de coelho.
• Para ELISA, certifique-se de que a proteína recombinante ou o peptídeo de recobrimento corresponda à região do imunógeno para maximizar a captura do anticorpo. Titular o anticorpo para determinar a concentração de trabalho ideal em seu sistema de ensaio.
• A reatividade cruzada é relatada para humano, camundongo e rato; valide em seu organismo modelo de escolha usando controles positivos e negativos. A expressão do CLOCK é circadiana, portanto, considere a coleta no momento do dia ao examinar os níveis endógenos.

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