Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-Complemento C4A para WB, IF-P, ELISA - P0C0L4

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do Complemento C4-A

• O Complemento C4-A é um componente não enzimático das vias do complemento clássica, da lectina e da GZMK, atuando como um precursor que é ativado proteoliticamente para participar da defesa imunológica inata.
• Após clivagem por proteases do complemento como C1S, MASP2 ou GZMK, ele gera C4b, que se liga covalentemente às superfícies dos patógenos, agindo como opsonina para marcar antígenos para remoção. Referências relacionadas: PMID:8538770 PMID:27738201
• C4b então recruta o complemento C2b para formar as C3 e C5 convertases, que clivam e ativam C3 e C5, propagando a cascata do complemento. Referências relacionadas: PMID:12878586 PMID:18204047 PMID:2387864
• O fragmento C4a, liberado durante a ativação, é estruturalmente semelhante às anafilatoxinas; no entanto, seu papel permanece pouco claro e relatos anteriores de função como mediador inflamatório podem ser devidos a contaminação. Referências relacionadas: PMID:6167582 PMID:25659340
• O Complemento C4-A é principalmente secretado por hepatócitos, com maior expressão no fígado; a síntese extra-hepática em tecidos como glândula adrenal, tireoide e rim contribui para a proteção imunológica local. Referências relacionadas: PMID:11367523
• Subcelularmente, ele é encontrado secretado no espaço extracelular, e também localizado nas sinapses, axônios neuronais, dendritos e superfícies celulares.
• A proteína sofre várias modificações pós-traducionais, incluindo formação de pontes dissulfeto, glicosilação, fosforilação e sulfatação, e contém uma ligação tioester reativa essencial para a ligação covalente às superfícies alvo.
• Está associado a variantes de doença no lúpus eritematoso sistêmico e carrega determinantes de antígenos de grupo sanguíneo; existem múltiplas isoformas devido ao splicing alternativo.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde a um fragmento C-terminal (aa 940-1237), que pode conferir especificidade isoforma; no entanto, a reatividade cruzada com a C4B altamente homóloga deve ser verificada experimentalmente.
• Para Western blotting, utilize géis de poliacrilamida de baixa porcentagem e tempos de transferência estendidos para resolver e transferir eficientemente o alvo de alto peso molecular (~193 kDa).
• Na imunofluorescência (IF-P), como o C4A é secretado e pode se depositar nas superfícies celulares, otimize as condições de fixação e permeabilização para detectar tanto a proteína intracelular quanto a ligada à superfície.
• Para ELISA, este anticorpo pode ser usado como reagente de captura ou detecção; pareie com outro clone direcionado a um epítopo não sobreposto para o desenvolvimento de ELISA sanduíche.
• Como a ativação do complemento pode consumir C4, considere as condições de manuseio e armazenamento da amostra para preservar os níveis de proteína nativa.

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