Anticorpo monoclonal de coelho anti-COX5B para WB - P10606

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização da COX5B

• A COX5B (subunidade 5B da citocromo c oxidase) é uma subunidade codificada pelo núcleo do complexo IV mitocondrial (citocromo c oxidase), a enzima terminal da cadeia de transporte de elétrons.
• É um componente do complexo multissubunidade da citocromo c oxidase, que catalisa a redução do oxigênio molecular a água, acoplando essa reação ao bombeamento de prótons através da membrana interna mitocondrial.
• A proteína COX5B é sintetizada com um peptídeo de trânsito mitocondrial, que é clivado após a importação para a mitocôndria, gerando uma subunidade madura que se integra à membrana interna.
• A localização subcelular é restrita à membrana interna mitocondrial, onde contribui para a integridade estrutural e funcional do complexo IV.
• As modificações pós-traducionais incluem acetilação, e a proteína madura contém um sítio de ligação ao zinco, conforme indicado pela presença de um íon zinco na estrutura cristalina.
• O peso molecular teórico da COX5B humana madura é de aproximadamente 13,7 kDa, consistente com a banda observada de 13 kDa na SDS-PAGE.
• Como subunidade central da cadeia respiratória, a COX5B é essencial para a fosforilação oxidativa eficiente e a produção de ATP, e sua expressão é frequentemente utilizada como marcador da massa e da atividade mitocondrial.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno abrange os aminoácidos 29–129 da COX5B humana, correspondendo à proteína madura processada sem o peptídeo de direcionamento mitocondrial, provavelmente gerando anticorpos que reconhecem a forma endógena processada.
• Para Western blotting, espera-se uma banda em torno de 13 kDa em lisados de tecidos humanos, de camundongo e de rato ricos em mitocôndrias (por exemplo, coração, músculo esquelético e fígado). Utilize uma amostra enriquecida em fração mitocondrial para obter a detecção ideal.
• Para imunohistoquímica (IHC-P) e imunofluorescência (IF/ICC), a coloração deve apresentar um padrão citoplasmático pontilhado consistente com a localização mitocondrial. Recomenda-se a contracoloração com um marcador mitocondrial para validação.
• Em experimentos de imunoprecipitação (IP), o anticorpo pode coprecipitar outras subunidades do complexo IV; considere o uso de detergentes suaves para preservar a integridade do complexo nativo.
• A reatividade em ELISA pode ser utilizada para a detecção quantitativa de COX5B em lisados celulares ou teciduais, mas o desempenho deve ser validado com padrões conhecidos.
• A reatividade cruzada com camundongo e rato foi confirmada, mas verifique sempre a reatividade específica da espécie em seu próprio sistema experimental devido a possíveis variações de sequência.

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