Anticorpo policlonal de coelho anti-CRY2 para WB, IF/ICC, ELISA - Q49AN0

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização do CRY2

• O criptocromo-2 (CRY2) é um componente central do relógio circadiano, atuando como um repressor transcricional no braço negativo do ciclo de retroalimentação transcrição/tradução (TTFL). Ele interage com o heterodímero CLOCK/BMAL1 para inibir sua atividade transcricional.
• Juntamente com o CRY1, o CRY2 regula o período circadiano; embora ambos desempenhem funções redundantes, o CRY2 apresenta uma atividade repressora menos potente no cerebelo e no fígado e desempenha um papel crítico no ajuste do período circadiano do SCN ao se opor às ações do CRY1.
• O CRY2 está envolvido na modulação do metabolismo da glicose e dos lipídios, reprimindo genes-alvo do PPARD no músculo esquelético e regulando genes como LEP e ACSL4.
• Ele reprime a atividade transcricional induzida pelo receptor de glicocorticoides (NR3C1/GR) ao se ligar a elementos de resposta aos glicocorticoides e também reprime a transcrição de BHLHE40/DEC1 e NAMPT induzida por CLOCK-BMAL1.
• Subcelularmente, o CRY2 está localizado tanto no citoplasma quanto no núcleo, permitindo seu transporte entre esses compartimentos como parte da regulação do relógio.
• Modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação e ubiquitinação, são fundamentais para determinar o período circadiano (tau) e a estabilidade do CRY2.
• O CRY2 é amplamente expresso nos tecidos humanos, com níveis mais elevados no coração e no músculo esquelético, estando também presente no cérebro, fígado, rins e muitos outros tecidos.
• A proteína liga-se ao FAD e pode apresentar propriedades fotorreceptoras, embora, nos mamíferos, seu papel principal seja a regulação transcricional no mecanismo do relógio.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno corresponde à região C-terminal (aminoácidos 455-614), que pode estar bem exposta em condições desnaturantes; considere utilizar SDS-PAGE redutora para Western blot a fim de detectar a banda de 67 kDa.
• Para imunofluorescência/ICC, otimize os protocolos de fixação e permeabilização, pois o CRY2 está localizado tanto no citoplasma quanto no núcleo; metanol ou paraformaldeído com Triton X-100 podem produzir resultados diferentes.
• O ELISA pode ser utilizado para quantificação; considere uma abordagem de ELISA sanduíche com um par de anticorpos compatível e valide a linearidade e a sensibilidade utilizando proteína CRY2 recombinante.
• A reatividade cruzada foi confirmada para amostras humanas e de rato; ao utilizar outras espécies, faça um alinhamento de sequências e valide no sistema de amostra relevante.
• Inclua controles positivos apropriados (por exemplo, lisados de células HEK293 e HeLa) e controles negativos (amostras com knockdown ou knockout por siRNA) para confirmar a especificidade do anticorpo.

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