Anticorpo Monoclonal Coelho Anti-CTCF para WB, IF/ICC, IP, ELISA, ChIP, ChIP-seq, CUT&Tag - P49711

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do CTCF

• O CTCF, também conhecido como fator de ligação CCCTC ou proteína de 11 dedos de zinco, é um fator de ligação à cromatina que se liga a sítios de DNA específicos de sequência e regula a estrutura 3D da cromatina formando alças e ancorando o DNA a estruturas nucleares. Referências relacionadas: PMID:16949368, PMID:18347100, PMID:18654629
• Ele define limites entre DNA ativo e heterocromático ao se ligar a isolantes de cromatina, impedindo interações entre promotores e enhancers e silenciadores próximos, mediando assim o silenciamento gênico de longo alcance. Referências relacionadas: PMID:18347100, PMID:18654629, PMID:19322193
• O CTCF participa na expressão gênica alelo-específica no locus IGF2/H19 impresso, mediando a conformação de cromatina de ordem superior e restringindo o acesso do enhancer ao IGF2 no alelo materno. Referências relacionadas: PMID:16107875, PMID:16815976, PMID:17827499
• Desempenha um papel crítico na inativação do cromossomo X ao estabelecer um interruptor epigenético regulável e impedir a propagação de metilação estável em genes de escape. Referências relacionadas: PMID:11743158
• O CTCF está localizado principalmente no núcleo e associa-se a centrômeros e braços cromossômicos durante a metáfase, onde é necessário para a localização da coesina e a coesão das cromátides irmãs. Referências relacionadas: PMID:18550811, PMID:26321640
• Atua como um repressor transcricional de MYC e BAG1 e como um ativador transcricional de APP, demonstrando suas funções regulatórias duais. Referências relacionadas: PMID:8649389, PMID:9591631, PMID:9407128
• A proteína contém múltiplos sítios de modificação pós-traducional, incluindo acetilação, fosforilação e sumoilação (ligação isopeptídica), que regulam suas atividades de ligação à cromatina e transcricionais.
• O CTCF é expresso de forma ubíqua em tecidos humanos, mas está notavelmente ausente em espermatócitos primários, indicando papéis regulatórios específicos de tecido.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno abrange os aminoácidos 628–727 na região C-terminal do CTCF humano, um domínio distinto da região de ligação ao DNA dos dedos de zinco, potencialmente aumentando a especificidade do anticorpo para o CTCF endógeno em relação a outras proteínas de dedos de zinco.
• Para Western blotting, uma banda esperada em aproximadamente 83 kDa é prevista; a migração real pode diferir devido a modificações pós-traducionais ou condições do gel, portanto valide com um controle positivo conhecido.
• Para imunoprecipitação da cromatina (ChIP) e ChIP-seq, otimize as condições de reticulação e cisalhamento da cromatina para o seu tipo celular; inclua regiões genômicas de controle positivo (por exemplo, ICR de H19) e negativo para avaliar o enriquecimento.
• Ao realizar imunofluorescência, os protocolos de fixação e permeabilização devem ser testados empiricamente para garantir uma coloração nuclear robusta; a localização subcelular no núcleo e centrômeros pode ser observada.
• O anticorpo é adequado para CUT&Tag, oferecendo uma alternativa eficiente ao ChIP-seq com menor entrada de células; a validação das condições de marcação enzimática e da concentração de anticorpo é recomendada para resultados ideais.

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