Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-CXCL12/SDF-1 para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P48061

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do CXCL12

• CXCL12, também conhecido como fator derivado de células estromais 1 (SDF-1), é uma quimiocina CXC secretada que existe como múltiplos isoformas (alfa, beta, gama, delta, epsilon, teta) devido ao splicing alternativo.
• CXCL12 funciona como um quimioatraente para linfócitos T e monócitos, mas não neutrófilos, ligando e ativando o receptor CXCR4, levando à rápida mobilização de cálcio intracelular e migração celular direcionada. Referências relacionadas: PMID:18802065, PMID:39093700, PMID:8752281
• Também se liga ao receptor atípico de quimiocina ACKR3 (CXCR7), que atua como um receptor scavenger e ativa a via de sinalização beta-arrestina. Referências relacionadas: PMID:16107333, PMID:19255243
• CXCL12 pode ativar as integrinas ITGAV:ITGB3, ITGA4:ITGB1 e ITGA5:ITGB1 através de um local de ligação alostérico, independente do CXCR4. Referências relacionadas: PMID:29301984
• Regula positivamente a migração de monócitos e negativamente a adesão de monócitos através de um mecanismo mediado pela quinase LYN que inibe a ligação de LFA-1 ao ICAM-1. Referências relacionadas: PMID:18802065
• Uma forma truncada, SDF-1-alfa(3-67), mostra atividade quimiotática reduzida; a ligação a proteoglicanos da superfície celular inibe sua formação, preservando assim a atividade do CXCL12 de comprimento total localmente. Referências relacionadas: PMID:14525775
• As isoformas alfa e beta são expressas ubiquamente com os níveis mais altos no fígado, pâncreas e baço, enquanto a isoforma gama é expressa principalmente no coração, e as isoformas delta, epsilon e teta mostram a maior expressão no pâncreas.
• A proteína secretada madura contém características estruturais importantes, incluindo duas ligações dissulfeto e um peptídeo sinal, com um peso molecular de aproximadamente 11 kDa.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde aos aminoácidos 40–93 do CXCL12 humano (NP_000600.1), uma região dentro do domínio da quimiocina madura; portanto, espera-se que o anticorpo reconheça a proteína secretada. Para Western blot, prepare as amostras em condições redutoras e use um protocolo padrão de SDS-PAGE. Considere uma faixa inicial de diluição de 1:500–1:2000, seguida de otimização.
• Para IHC-P, realize a recuperação de antígeno induzida por calor e valide a coloração com controles de tecido apropriados. O CXCL12 é secretado, portanto, padrões de coloração extracelular podem ser observados.
• Em IF/ICC, considere usar um inibidor de secreção (por exemplo, brefeldina A) para aumentar o sinal intracelular; otimize as condições de fixação/permeabilização. O anticorpo pode marcar a via de Golgi/secretória.
• O anticorpo reage cruzadamente com CXCL12 de camundongo e rato, tornando-o adequado para estudos nessas espécies. No entanto, confirme sempre a especificidade no sistema modelo relevante.
• Devido ao splicing alternativo, múltiplas bandas podem ser detectadas no WB; compare com os pesos moleculares conhecidos das isoformas (alfa ~11 kDa). Use um controle positivo (por exemplo, CXCL12 recombinante ou linhagens celulares expressando níveis altos) para verificar a reatividade.

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