Anticorpo Policlonal Anti-CYP2F1 para WB, IHC-P, ELISA - P24903

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do CYP2F1

• O citocromo P450 2F1 (CYP2F1) é um membro da superfamília de mono-oxigenases do citocromo P450, que catalisam a oxidação de substâncias orgânicas e são fundamentais no metabolismo de xenobióticos e compostos endógenos.
• A enzima pode participar no metabolismo de vários pneumotoxicantes, incluindo naftaleno, e é capaz de desalquilar etoxicumarina, propoxicumarina e pentoxirresorufina, embora não mostre atividade em relação à etoxirresorufina e apenas atividade de desarilação traço em relação à benziloxirresorufina.
• O CYP2F1 bioativa o 3-metilindol (3MI) via desidrogenação para o putativo eletrófilo 3-metileno-indolenina, um composto implicado na toxicidade pulmonar.
• Esta proteína localiza-se na membrana do retículo endoplasmático e na membrana do microssomo, consistente com seu papel no sistema microssomal de mono-oxigenase.
• A expressão tecidual é predominantemente no pulmão, com detecção rara no fígado e placenta, destacando sua função especializada no metabolismo do trato respiratório.
• O CYP2F1 contém um grupo prostético heme e cofator de ferro, essenciais para sua atividade catalítica, e é classificado como uma oxidorredutase. O splicing alternativo do gene CYP2F1 foi relatado, potencialmente gerando isoformas diferentes.
• O peso molecular calculado da isoforma canônica é de aproximadamente 55,5 kDa, consistente com a banda observada em 56 kDa no SDS-PAGE.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde aos aminoácidos 100–290 do CYP2F1 humano, uma região provavelmente dentro do domínio citoplasmático que pode exibir conservação suficiente entre espécies para permitir a reatividade cruzada observada com humano, rato e rato.
• Para Western blot, uma diluição inicial típica para anticorpos policlonais pode ser explorada (por exemplo, 1:500–1:2000), e o ensaio deve ser validado em uma linhagem celular ou lisado de tecido derivado de pulmão onde a expressão de CYP2F1 é esperada.
• No IHC-P, métodos de recuperação de antígeno (por exemplo, recuperação de epítopo induzida por calor a pH 6 ou 9) podem ser necessários; inclua controles apropriados, como secções de tecido pulmonar. Testes preliminares com diferentes protocolos de fixação são recomendados.
• Para ELISA, o anticorpo pode ser usado como reagente de captura ou detecção em formato sanduíche, mas a reatividade cruzada com outros membros da família CYP deve ser avaliada devido a semelhanças de sequência.
• Como o CYP2F1 é uma proteína de membrana, considere o uso de detergentes suaves em tampões de lise (por exemplo, 1% NP-40 ou Triton X-100) para garantir uma solubilização adequada.

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