Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-CYP51A1 para WB, IHC-P, ELISA - Q16850

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da CYP51A1

• A CYP51A1, também conhecida como lanosterol 14-alfa desmetilase, pertence à superfamília do citocromo P450 e é a única enzima citocromo P450 conservada em todos os reinos biológicos (bactérias, fungos, plantas e animais). É uma enzima chave na via de biossíntese de esteróis responsável pela conversão de lanosterol em colesterol em mamíferos.
• Atividade catalítica: Catalisa a remoção oxidativa em três etapas do grupo 14alfa-metil (C-32) de esteróis como o lanosterol e o 24,25-diidrolanosterol, produzindo formiato e convertendo-os em 4,4-dimetil-5alfa-colesta-8,14,24-trien-3beta-ol e 4,4-dimetil-8,14-colestadien-3beta-ol, respectivamente. Estes são intermediários críticos na biossíntese do colesterol. Referências relacionadas: PMID:20149798, PMID:8619637, PMID:9559662
• A enzima é uma proteína de membrana integral localizada no retículo endoplasmático e nas membranas microsomais, consistente com seu papel no metabolismo lipídico.
• Contém um grupo prostético heme e requer ferro como cofator, característica da atividade monooxigenase que utiliza oxigênio molecular e NADPH.
• A CYP51A1 exibe ampla especificidade de substrato; além dos esteróis mamíferos, pode desmetilar substratos não mamíferos como o eburicol, embora com menor eficiência. Referências relacionadas: PMID:9559662
• A proteína é expressa de forma ubíqua, com os níveis mais altos observados em testículo, ovário, adrenal, próstata, fígado, rim e pulmão, refletindo a alta demanda por colesterol em tecidos esteroidogênicos e na síntese de membranas.
• O splicing alternativo gera múltiplas variantes de transcrição, potencialmente modulando a função ou regulação da enzima.
• Modificações pós-traducionais incluem conjugação do tipo ubiquitina (Ubl), o que pode afetar a estabilidade, localização ou atividade da proteína.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunogênio utilizado é uma proteína recombinante correspondente aos aminoácidos 400-500 da CYP51A1 humana, direcionando-se à região C-terminal. Esta região provavelmente está bem exposta em condições nativas e desnaturadas, tornando o anticorpo adequado para múltiplas aplicações.
• Para análise de Western blot (WB), espera-se uma banda em aproximadamente 57 kDa. Considere o uso de marcadores de peso molecular apropriados e valide a especificidade usando linhagens celulares ou tecidos positivos para CYP51A1 (por exemplo, fígado, testículo).
• Na imuno-histoquímica (IHC-P), pode ser necessário o recuperação antigênica. Teste em tecidos de controle positivo conhecidos, como fígado ou glândula adrenal, e inclua controles de isotipo para confirmar padrões de coloração específicos no retículo endoplasmático.
• Para ELISA, o anticorpo pode ser usado como reagente de detecção ou captura. Emparelhe com um padrão adequado, como o imunogênio recombinante ou a proteína CYP51A1 purificada, e valide na matriz de amostra relevante.
• Dada a alta homologia de sequência entre a CYP51A1 humana, de camundongo e de rato, espera-se reatividade cruzada. No entanto, a validação experimental em cada espécie é recomendada se for usada para amostras não humanas.
• Ao manusear, armazene nas temperaturas recomendadas e evite ciclos repetidos de congelamento-descongelamento para preservar a atividade.

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