Anticorpo policlonal anti-Cytohesin-1 (CYTH1) para WB, IF/ICC, ELISA - Q15438

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização da Cytohesin-1

• A Cytohesin-1 (CYTH1) é membro da família das citohesinas de fatores de troca de nucleotídeos de guanina (GEFs) que ativam pequenas GTPases do fator de ribosilação do ADP (ARF), atuando como regulador essencial do tráfego vesicular intracelular.
• A proteína é caracterizada por um domínio de homologia à pleckstrina (PH), responsável pela ligação a fosfoinositídeos, um domínio Sec7, responsável por sua atividade de GEF, e um domínio de hélice enrolada envolvido nas interações proteína-proteína.
• A CYTH1 catalisa especificamente a troca de nucleotídeos de guanina em ARF1, ARF5 e ARF6, promovendo a substituição de GDP por GTP e, assim, controlando seu estado de ativação.
• Por meio da regulação de ARF6, desempenha um papel fundamental nos eventos de tráfego de membrana essenciais para a remodelação das junções e o estabelecimento da polaridade das células epiteliais.
• É expressa ubiquamente nos tecidos, refletindo seu papel fundamental nos processos de transporte celular.
• Subcelularmente, a CYTH1 localiza-se na membrana celular, no citosol e nas junções célula-célula, incluindo junções estreitas e junções aderentes, em concordância com suas funções na dinâmica da membrana e na adesão celular.
• As modificações pós-traducionais incluem acetilação e conjugação com ubiquitina, e a estrutura tridimensional da proteína foi determinada.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno consiste nos 70 aminoácidos N-terminais da CYTH1 humana, uma região que pode ser conservada entre as espécies (sustentando a reatividade cruzada do anticorpo com camundongo e rato) e potencialmente preservada em isoformas de splicing alternativo.
• Para Western blotting, a banda esperada migra aproximadamente em 46 kDa; a diluição ideal do anticorpo e as condições de bloqueio devem ser determinadas empiricamente utilizando lisados de controle positivo (por exemplo, células HeLa, HEK293 ou U-2 OS).
• Em imunofluorescência/imunocitoquímica, recomenda-se o uso de fixadores como paraformaldeído a 4% e permeabilização com Triton X-100 a 0,1–0,3%; entretanto, o método escolhido deve preservar as estruturas de membrana e juncionais onde a CYTH1 está localizada.
• Para aplicações de ELISA, o anticorpo pode ser utilizado como reagente de captura ou de detecção após otimização adequada, incluindo o teste de diferentes condições de revestimento e bloqueio.

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