Anticorpo Monoclonal Anti-DAP Quinase 1 (DAPK1) para WB e ELISA - P53355

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da DAP Quinase 1 (DAPK1)

• Codifica uma serina/treonina quinase dependente de cálcio/calmodulina que integra sinais para apoptose, autofagia e sobrevivência celular, dependendo do contexto celular.
• Medeia tanto a morte apoptótica tipo I dependente de caspase quanto a morte autofágica tipo II independente de caspase, caracterizada pelo acúmulo de vesículas autofágicas.
• Regula diversos substratos, incluindo PIN1, TPM1, STX1A, PRKD1, BECN1, TSC2, RPS6, MYL9, DAPK3 e GRINB, influenciando assim a dinâmica do citoesqueleto, a exocitose, a sinalização de estresse, a indução da autofagia, a atividade de mTORC1 e a excitotoxicidade mediada pelo receptor NMDA.
• A isoforma 2 não possui atividade apoptótica, mas mantém a capacidade de induzir formação de bolhas na membrana; ela é expressa em tecido intestinal normal e em carcinomas colorretais.
• Localiza-se no citoplasma e se associa ao citoesqueleto.
• Contém domínios distintos: domínio quinase N-terminal, região de ligação à calmodulina, repetições de anquirina e um domínio de morte C-terminal; também possui motivos de ligação a ATP e GTP.
• Está listado em palavras-chave incluindo splicing alternativo, apoptose, autofagia, fosfoproteína e conjugação Ubl, refletindo sua regulação complexa e versatilidade funcional.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno está localizado entre os resíduos 250–350, uma região entre o domínio quinase e o motivo de ligação à calmodulina; considere verificar a acessibilidade do epítopo em condições nativas versus desnaturantes.
• Para Western blot, uma banda principal em ~160 kDa representa a DAPK1 de comprimento completo; bandas adicionais podem surgir de isoformas de splicing ou produtos de degradação — é recomendado a validação com controles adequados (ex.: lisados de knockdown ou knockout).
• Confirme a reatividade cruzada em amostras de camundongo, pois o anticorpo é relatado como capaz de reconhecer DAPK1 tanto humano quanto de camundongo.
• Para ELISA, protocolos indiretos ou sanduíche padrão podem ser aplicados; otimize a concentração de revestimento e as condições de detecção para o seu formato específico de ensaio.
• Leve em consideração que a isoforma 2 pode não conter a sequência peptídica; verifique os perfis de expressão no seu conjunto de amostras (ex.: tecido intestinal normal vs. canceroso) para evitar interpretações errôneas.

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