Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-DARPP32 para WB, ELISA - Q9UD71

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização de DARPP32 (PPP1R1B)

• DARPP32, codificado pelo gene PPP1R1B, é uma molécula bifuncional de transdução de sinal que integra sinais de dopamina e cAMP por meio da regulação da proteína fosfatase 1 (PP1) e da proteína quinase A (PKA).
• Ele atua como um potente inibidor da PP1 quando fosforilado em Thr34 pela PKA, levando a alterações na fosforilação de substratos neuronais downstream e modulação da plasticidade sináptica.
• A proteína também é fosforilada em Thr75 pela quinase 5 dependente de ciclina (CDK5), que a converte em um inibidor da PKA, demonstrando seu papel como interruptor molecular em neurônios estriatais.
• DARPP32 é predominantemente citoplasmático e altamente enriquecido em neurônios espinhosos médios do striato, onde medeia os efeitos da dopamina, glutamato e outros neurotransmissores.
• O splicing alternativo do transcrito PPP1R1B gera múltiplas isoformas, incluindo uma forma de comprimento total bem caracterizada e uma variante truncada, que podem ter propriedades funcionais distintas.
• Modificações pós-tradução como acetilação e fosforilação em múltiplos sítios ajustam finamente sua atividade, estabilidade e distribuição subcelular.
• A desregulação da sinalização de DARPP32 tem sido associada a distúrbios neurológicos e psiquiátricos, incluindo doença de Parkinson, esquizofrenia e dependência química.
• O peso molecular teórico da isoforma canônica é de aproximadamente 23 kDa, consistente com a banda observada no Western blotting.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• Para Western blot, utilize buffer RIPA preparado na hora contendo inibidores de fosfatases e proteases para preservar o estado de fosforilação de DARPP32.
• Considere utilizar um buffer de carregamento redutor e aquecer as amostras a 70°C por 10 minutos para evitar artefatos de agregação comumente observados com DARPP32.
• O imunógeno corresponde à região N-terminal (aa1-100); este anticorpo deve reconhecer tanto a forma de comprimento total quanto certos fragmentos N-terminais.
• Devido à alta conservação de sequência, valide a especificidade do anticorpo em amostras de knockout ou knockdown por siRNA, especialmente ao trabalhar com tecidos de camundongo ou rato.
• Para ELISA, determine a concentração ótima de revestimento por meio de titulação em tabuleiro de xadrez usando o peptídeo de imunização ou a proteína recombinante DARPP32 como padrão.
• Inclua um controle positivo conhecido (ex.: lisado de tecido estriatal) e um controle negativo (ex.: linha celular não neuronal) em cada experimento.
• Como DARPP32 é uma fosfoproteína de baixa abundância em algumas amostras, estratégias de aumento de sinal, como o uso de substratos ECL de alta sensibilidade, podem ser necessárias para a detecção.

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