Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-DARS para WB, IHC-P, IP, ELISA - P14868

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do DARS

• O DARS, também conhecido como aspartil-tRNA sintetase (AspRS) e proteína indutora de proliferação celular 40, é codificado pelo gene DARS1 em humanos. Pertence à família de aminoacil-tRNA sintetases de classe II, que desempenha um papel fundamental na tradução de proteínas.
• A enzima catalisa a ligação específica de aspartato ao seu tRNA cognato em uma reação de duas etapas: o aspartato é primeiro ativado pelo ATP para formar aspartil-AMP e, em seguida, transferido para a extremidade aceitadora do tRNA, uma etapa crítica para a síntese precisa de proteínas citoplasmáticas.
• Predominantemente localizado no citosol, o DARS é essencial para o fornecimento de aspartil-tRNA para a tradução ribossômica, impactando diretamente a manutenção e o crescimento do proteoma celular.
• A análise de expressão específica por tecido mostra níveis elevados no cérebro em desenvolvimento e no adulto, particularmente nas zonas ventriculares/subventriculares, subcampos do hipocampo e córtex cerebral, com expressão preferencial em neurônios. Neurônios periféricos no cólon também expressam DARS.
• Estudos proteômicos identificaram acetilação e fosforilação do DARS, modificações pós-traducionais que podem modular sua atividade enzimática, distribuição subcelular ou interações proteína-proteína.
• Mutações patogênicas no DARS estão associadas à leucoencefalopatia com envolvimento do tronco encefálico e medula espinhal e elevação de lactato (HBSL), um distúrbio neurológico grave, destacando o papel crítico da enzima no sistema nervoso central.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• A sequência do imunógeno (aa 222–501) reside dentro de um domínio catalítico conservado do DARS; esta região compartilha alta identidade entre humanos, camundongos e ratos, apoiando a reatividade cruzada observada.
• Para Western blotting, o peso molecular previsto é de ~57 kDa. É aconselhável validar o anticorpo usando controles positivos como lisados de HeLa, HEK293 ou cérebro de camundongo/rato, e considerar condições redutoras e não redutoras.
• Em imuno-histoquímica (IHCHC-P), a recuperação ótima de antígeno e a diluição do anticorpo devem ser determinadas empiricamente. O DARS é altamente expresso em tecidos cerebrais; portanto, seções de cérebro humano ou de roedores são recomendadas para validação inicial.
• Ao realizar imunoprecipitação, a natureza policlonal do anticorpo pode melhorar a captura de complexos nativos de DARS. Inclua controles de isotipo apropriados e etapas de pré-limpeza para reduzir o ruído de fundo.
• Para aplicações de ELISA, o anticorpo pode ser empregado como reagente de captura ou detecção. Titulação e ensaios de reatividade cruzada contra sintetases intimamente relacionadas são recomendados para garantir a especificidade.
• Modelos de knockdown ou knockout podem servir como controles negativos para confirmar a especificidade do anticorpo, especialmente em aplicações quantitativas onde a quantificação precisa é necessária.

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