Anticorpo policlonal de coelho anti-DDIT3/CHOP para WB, IHC-P, IP, ELISA - P35638

Especificações e Parâmetros Essenciais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização de DDIT3/CHOP

• DDIT3 (transcrito 3 induzível por dano ao DNA), também denominado CHOP (proteína homóloga a C/EBP), CHOP-10 e GADD153, é um membro da família de fatores de transcrição C/EBP que atua como um inibidor dominante-negativo da transcrição mediada por C/EBP.
• Funciona como um mediador central da resposta ao estresse do retículo endoplasmático (RE), desencadeando a parada do ciclo celular e a apoptose sob diversas condições de estresse. Referências relacionadas: PMID:15322075 PMID:15775988 PMID:19672300
• DDIT3 forma heterodímeros com outras proteínas C/EBP, prejudicando sua capacidade de ligação ao DNA e reprimindo a expressão de genes-alvo.
• Como regulador transcricional, induz genes pró-apoptóticos, como TRIB3, BBC3/PUMA e BCL2L11/BIM, enquanto suprime a expressão dos genes antiapoptóticos BCL2 e MYOD1. Referências relacionadas: PMID:15775988 PMID:17709599 PMID:20876114 PMID:18940792 PMID:19672300 PMID:20829347
• DDIT3 regula negativamente a sinalização canônica de Wnt ao se ligar a TCF7L2/TCF4 e bloquear sua atividade transcricional. Referências relacionadas: PMID:16434966
• A proteína desloca-se dinamicamente entre o citoplasma e o núcleo, acumulando-se no núcleo durante o estresse do RE para coordenar programas de expressão gênica.
• DDIT3 está sujeita a modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação e conjugação semelhante à ubiquitina, que podem modular sua atividade e sua degradação.
• Além da apoptose, DDIT3 participa de respostas inflamatórias ao promover a maturação de IL-1β dependente de caspase-11 (CASP4) e contribui para a vascularização pós-natal por meio da regulação de NOS3.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno utilizado para gerar este anticorpo corresponde à região N-terminal (aminoácidos 1–100) de DDIT3 humano, um domínio relativamente conservado; a reatividade cruzada com camundongo e rato foi confirmada experimentalmente, mas o alinhamento de sequências deve ser verificado para outras espécies.
• Para western blot (WB): detecte uma banda de aproximadamente 19 kDa; observe que modificações pós-traducionais ou isoformas induzidas por estresse podem produzir bandas adicionais. Otimize o bloqueio e a diluição do anticorpo para minimizar o fundo, pois preparações policlonais podem apresentar ligação inespecífica.
• Para imuno-histoquímica (IHC-P): recomenda-se a recuperação antigênica; valide a coloração em cortes de tecido submetidos a estresse do RE ou apoptose, nos quais DDIT3 esteja aumentada.
• Para imunoprecipitação (IP): o anticorpo liga-se a um epítopo peptídico linear e deve capturar DDIT3 nativa com eficácia; inclua controles positivos e negativos adequados para confirmar a especificidade.
• Para ELISA: adequado para quantificar DDIT3 em lisados celulares ou amostras de soro; combine com um anticorpo de detecção compatível ao desenvolver um ensaio do tipo sanduíche.
• Como se trata de um anticorpo policlonal, a consistência entre lotes pode variar; considere reservar um lote de referência para estudos de longo prazo.

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