Anticorpo Policlonal Anti-DDOST para WB, IHC-P, ELISA - P39656

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da DDOST

• Identidade da proteína e isoformas: DDOST codifica a subunidade de 48 kDa da dolicil-difosfooligossacarídeo--proteína glicosiltransferase, também designada como OST48, WBP1, AGER1 e CDG1R. O splicing alternativo produz múltiplas isoformas.
• Função central de glicosilação: A proteína é uma subunidade essencial do complexo oligossacariltransferase (OST), que catalisa a transferência em bloco de um glicano rico em manose pré-montado (Glc3Man9GlcNAc2) do dolicol-pirofosfato para resíduos de asparagina em polipeptídeos nascentes dentro do RE (PubMed:31831667).
  Referências relacionadas:
  PMID:31831667
• Mecanismo cotraducional: A atividade da OST é acoplada à translocação de proteínas através do translocon Sec61, permitindo que a N-glicosilação ocorra cotraducionalmente no lado luminal da membrana do RE.
• Montagem do complexo OST: DDOST é necessária para a montagem de complexos OST contendo STT3A e STT3B, que medeiam a glicosilação co e pós-traducional, respectivamente (PubMed:22467853).
  Referências relacionadas:
  PMID:22467853
• Localização subcelular: A proteína é um componente integral da membrana do retículo endoplasmático com um peptídeo sinal e múltiplos domínios transmembrana.
• Relevância clínica: Mutações em DDOST estão associadas a distúrbios congênitos da glicosilação, destacando sua importância na saúde e nas doenças humanas.
• Peso molecular: O polipeptídeo DDOST canônico tem uma massa molecular calculada de aproximadamente 50,8 kDa (UniProt), enquanto a proteína madura migra em torno de 51 kDa em SDS-PAGE.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno (proteína recombinante cobrindo os aminoácidos 40–300) corresponde ao domínio luminal do DDOST humano, provavelmente gerando anticorpos que reconhecem epítopos nativos e desnaturados. Para WB, condições desnaturantes e redutoras são apropriadas.
• Ao realizar IHC-P, a recuperação de antígeno com tratamento térmico ou enzimático pode melhorar a detecção; recomenda-se a inclusão de um tecido de controle positivo conhecido, como fígado ou pâncreas.
• Para ELISA, o anticorpo pode ser usado para detecção direta ou de captura de DDOST recombinante ou endógeno em lisados celulares e teciduais. A reatividade cruzada com DDOST de camundongo e rato foi relatada, portanto, experimentos de titulação em cada espécie são aconselhados.
• A otimização do sinal pode exigir a determinação empírica da diluição do anticorpo. Comece com 1:500–1:2000 para WB e 1:200 para IHC-P e ajuste conforme necessário.
• Como a DDOST é uma proteína residente no RE expressa de forma ubíqua, ela pode servir como um controle de carga ou padrão de referência para estudos de glicosilação.

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