Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-DDX21 para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q9NR30

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da DDX21

• DDX21, também conhecida como helicase de RNA nucleolar 2, Gu-alfa e proteína DEAD box 21, é um membro da família de helicases de RNA DEAD-box, com um peso molecular previsto de ~87 kDa (UniProt: Q9NR30).
• No nucléolo, a DDX21 se localiza nos lócus de DNA ribossomal e se liga diretamente a rRNAs e RNAs nucleolares pequenos (snoRNAs), promovendo a transcrição, o processamento e a 2'-O-metilação do rRNA ao facilitar o recrutamento de snoRNA. Referências relacionadas: PMID:25470060 , PMID:25477391
• No nucleoplasma, a DDX21 se liga ao RNA 7SK e é recrutada para os promotores de genes transcritos pela RNA polimerase II, onde facilita a liberação do P-TEFb do complexo inibitório 7SK snRNP de uma maneira dependente de helicase, aumentando assim a transcrição. Referências relacionadas: PMID:25470060
• A DDX21 atua como um cofator transcricional para JUN, sendo necessária para a fosforilação de JUN na Ser-77. Referências relacionadas: PMID:11823437 , PMID:25260534
• A proteína exibe atividade de helicase de RNA dependente de ATP (desenrolando RNA de fita dupla) e atividade de "foldase" de RNA (introduzindo estrutura secundária em RNA de fita simples). Referências relacionadas: PMID:9461305
• A desacetilação pela SIRT7 ativa a função de helicase da DDX21, permitindo que ela supere o bloqueio da RNA polimerase mediado por loops-R e previna danos ao DNA associados à transcrição. Referências relacionadas: PMID:28790157
• A DDX21 é um componente de um complexo citoplasmático multi-helicase–TICAM1 que detecta RNA de fita dupla viral, contribuindo para a imunidade inata antiviral.
• Subcelularmente, a DDX21 é principalmente nucleolar e nucleoplasmática, mas também pode se localizar no citoplasma, citosol e mitocôndrias sob certas condições.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno abrange os aminoácidos 1–180 próximos ao N-terminal da DDX21. Como um anticorpo policlonal de coelho gerado contra uma proteína de fusão recombinante, ele pode reconhecer múltiplos epítopos dentro desta região.
• Para western blot (WB) em condições desnaturantes, espera-se uma banda correspondente à proteína de comprimento total em aproximadamente 87 kDa. Lisados de linhagens celulares humanas ou de camundongo com expressão confirmada de DDX21 devem ser usados como controles positivos.
• A localização predominantemente nucleolar e nucleoplasmática da DDX21 a torna adequada para imunofluorescência (IF/ICC) e imuno-histoquímica (IHC-P). Pode-se observar enriquecimento nuclear e coloração pontilhada nucleolar; recomenda-se a inclusão de marcadores de organelas apropriados para verificação.
• Dada a natureza ampla de ligação ao RNA e multi-domínio da DDX21, o desempenho do anticorpo pode variar com os protocolos de fixação, permeabilização e recuperação de antígeno. É aconselhável otimizar esses parâmetros para o tipo específico de célula ou tecido.
• Para aplicações de ELISA, o anticorpo pode ser usado como um reagente de captura ou detecção seguindo a titulação padrão para determinar as concentrações de trabalho ideais.

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