Anticorpo Policlonais Anti-DHFR para WB - P00374

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da DHFR

• A DHFR catalisa a redução de 7,8-dihidrofolato a 5,6,7,8-tetrahidrofolato dependente de NADPH, uma etapa crítica no metabolismo de um carbono. Referências relacionadas: PMID:12096917 PMID:15039552 PMID:17569517
• Essa reação é essencial para a síntese de novo de timidilato, glicina e purinas, fornecendo precursores de DNA para genomas nucleares e mitocondriais. Referências relacionadas: PMID:21876188 PMID:22235121
• A DHFR se localiza no citoplasma, mitocôndrias e núcleo, apoiando o metabolismo de folato em múltiplos compartimentos celulares.
• A enzima é amplamente expressa em tecidos fetais e adultos, com níveis mais altos no cérebro adulto e no sangue total.
• O splicing alternativo produz múltiplas isoformas, e mutações no gene DHFR estão associadas à resistência ao metotrexato e variantes da doença.
• A DHFR liga seu próprio mRNA e o da DHFR2, indicando um potencial papel regulador na expressão gênica pós-transcricional.
• A proteína sofre ubiquitinação e foi identificada em triagens proteômicas de larga escala.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno cobre a DHFR humana de comprimento total (aa 1-187), sugerindo reatividade potencial com proteínas nativas em espécies com alta homologia (confirmada para humano e camundongo). Valide em seu sistema de amostras.
• Para Western blotting, espera-se uma banda de ~21 kDa. Otimize as condições de bloqueio e detecção, e inclua controles de carga apropriados.
• Para imunofluorescência/ICC, considere protocolos de fixação e permeabilização que preservem a localização da DHFR mitocondrial e nuclear.
• Ao realizar ELISA, DHFR expressa recombinante ou lisados de células podem servir como antígenos; recomenda-se a titulação do anticorpo.
• A expressão de DHFR varia de acordo com o tecido e o estágio do ciclo celular; inclua controles positivos e negativos relevantes em seus experimentos.
• Como um anticorpo policlonal, avalie a consistência entre lotes e considere o uso de um peptídeo de bloqueio para confirmar a especificidade.

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