Anticorpo policlonal anti-DHX9/RNA Helicase A para WB, IF/ICC, IP, ELISA - Q08211

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização da DHX9/RNA Helicase A

• A DHX9, também conhecida como RNA helicase A, proteína 9 da caixa DEAH, leukophysin (LKP) e helicase II de DNA nuclear (NDH II), é uma RNA-helicase multifuncional da caixa DEAH.
• Possui atividade helicase dependente de ATP, com direção 3'→5', capaz de desenrolar uma ampla variedade de substratos, incluindo dsDNA, dsRNA, híbridos DNA:RNA, forquilhas, D-loops, R-loops, DNA triplex e G-quadruplexes; requer uma cauda de fita simples 3' para a entrada. Liga-se a ssDNA, ssRNA, RNA poli(A) e substratos circulares; estimula o relaxamento de superespiras mediado por TOP2A. Referências relacionadas: PMID:1537828 PMID:20669935 PMID:21561811 PMID:24049074 PMID:12711669
• Atua como coativador transcricional, fazendo a ponte entre a RNA-polimerase II e fatores de transcrição (BRCA1, CREBBP, RELA, SMN1), e liga-se ao promotor de CDKN2A. Referências relacionadas: PMID:11038348 PMID:11149922 PMID:11416126
• Desempenha funções diversas na regulação gênica pós-transcricional: coopera com NUP98 no splicing alternativo, resolve estruturas prejudiciais de dsRNA formadas por repetições Alu invertidas e facilita a exportação nuclear de mRNAs não processados contendo CTE. Referências relacionadas: PMID:11402034 PMID:16680162 PMID:28221134 PMID:28355180 PMID:10924507 PMID:9162007
• Está envolvida na tradução de mRNA: aumenta a tradução por meio do PCE na 5'-UTR, estabiliza o mRNA de MYC por meio do complexo mediado por CRD e estimula a tradução dependente de colágeno e LIN28A juntamente com LARP6 e LIN28A. Referências relacionadas: PMID:16680162 PMID:19029303 PMID:22190748 PMID:21247876
• Funciona como fator de carregamento de siRNA para a montagem do RISC e o silenciamento gênico mediado por RNA. Referência relacionada: PMID:17531811
• Na imunidade inata, liga-se a dsRNA curto derivado de rotavírus e desencadeia a ativação do inflamassoma NLRP9, levando à liberação de IL-18 e à piroptose. Referência relacionada: PMID:28636595
• Predominantemente nuclear (nucleoplasma, nucléolo), mas também se localiza no citoplasma, no centrossomo e no citoesqueleto; está sujeita a extensas modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação, acetilação, metilação e ubiquitinação.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno corresponde aos aminoácidos 329–563 da DHX9, uma região conservada em humanos, camundongos e ratos; essa sequência está localizada no domínio central da helicase e deve detectar múltiplas isoformas.
• Para Western blotting, o peso molecular previsto é de aproximadamente 141 kDa. Garanta uma transferência adequada da proteína e utilize marcadores de peso molecular apropriados. Otimize o bloqueio e a diluição do anticorpo de acordo com o tipo de amostra.
• Para imunofluorescência/imunocitoquímica, a DHX9 está distribuída nos compartimentos nuclear e citoplasmático. Valide as condições de fixação/permeabilização para preservar a acessibilidade do antígeno e considere o uso de colorações complementares para estruturas subcelulares.
• Para imunoprecipitação, utilize tampões de lise otimizados contendo inibidores de proteases e fosfatases para manter as interações proteicas. Um controle negativo (por exemplo, IgG de coelho) é essencial.
• O desempenho do ELISA deve ser calibrado com antígeno purificado ou lisados celulares, e a reatividade cruzada com helicases relacionadas da caixa DEAH pode ser avaliada conforme os requisitos de especificidade do experimento.

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