Anticorpo policlonal de coelho Anti-DiMethyl-DNMT3A-K44 (O88508) para IF/ICC e ELISA

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da DNA (citosina-5)-metiltransferase 3A (DNMT3A)

• A DNMT3A é uma enzima chave necessária para a metilação de novo do DNA em todo o genoma, essencial para estabelecer os padrões de metilação durante o desenvolvimento. Ela modifica o DNA de forma não processiva e pode metilar tanto sítios CpG quanto não CpG.
• A enzima funciona em coordenação com modificações de histonas, metilando preferencialmente o DNA ligador entre nucleossomos e é inibida pela histona H1. Ela também participa da impressão genética paterna e materna, com metilação da maioria dos loci impressos nas células germinativas.
• A DNMT3A atua como um corepressor transcricional, por exemplo, ao interagir com ZBTB18, e pode reprimir a transcrição por meio do recrutamento da atividade HDAC. Ela é recrutada para regiões genômicas marcadas por histona H3 trimetilada na Lys36 (H3K36me3).
• Subcelularmente, a DNMT3A se localiza predominantemente no núcleo e se associa aos cromossomos, acumulando-se nas repetições de satélites maiores da heterocromatina pericêntrica. Ela também pode ser encontrada no citoplasma.
• Existem duas isoformas: a isoforma 1 é expressa ubiquitariamente em níveis baixos, enquanto a expressão da isoforma 2 é restrita a tecidos que passam por metilação de novo ativa, como baço, testículo e timo.
• A proteína sofre múltiplas modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação (ex.: em Ser102, Ser239, Ser251, Ser386, Ser389, Thr120, Thr257), metilação (ex.: omega-N-metilarginina em Arg167) e auto-metilação em Cys706.

Referências relacionadas: PMID:10555141, PMID:11399089, PMID:11919202, PMID:16567415, PMID:17713477, PMID:9662389, PMID:11350943, PMID:18823905, PMID:15215868, PMID:20547484, PMID:21481189, PMID:12138111, PMID:15456878, PMID:21183079, PMID:24129315

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo sintético dimetilado na Lys44 da DNMT3A de camundongo. Para IF/ICC, considere que essa modificação pode ser específica do contexto; valide no seu sistema comparando os sinais entre o bloqueio com peptídeo metilado e não metilado ou usando controles de knockout/knockdown.
• As aplicações de ELISA podem se beneficiar do uso do peptídeo imunizante como controle positivo e de um peptídeo não modificado como controle negativo para confirmar a especificidade pela dimetilação.
• Dada a reatividade cruzada com humano e rato, este anticorpo pode ser adequado para estudar sítios de metilação conservados entre espécies, mas confirme a reatividade específica da espécie nos seus ensaios.
• As diluições de trabalho ideais devem ser determinadas empiricamente; os intervalos típicos para IF/ICC e ELISA dependem da aplicação e devem ser otimizados pelo usuário final.

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