Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-DNA-PKcs para WB, IP, IF/ICC, IHC-P, ELISA - P78527

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização de DNA-PKcs

• DNA-PKcs (subunidade catalítica da proteína quinase dependente de DNA), também denominado DNPK1, p460, HYRC ou XRCC7, é codificado pelo gene PRKDC (ID do Gene: 5591) e funciona como a subunidade catalítica do complexo DNA-PK.
• Como uma serina/treonina-proteína quinase, ela atua como um sensor molecular para danos ao DNA e é essencial para a junção não homóloga de extremidades (NHEJ), a via principal de reparo de quebras de fita dupla (DSBs) e recombinação V(D)J. A ligação ao DNA é necessária para sua atividade catalítica, e ela é recrutada por XRCC5/Ku80 e XRCC6/Ku70 nas extremidades do DNA, onde protege, alinha e sequestra as extremidades quebradas para evitar degradação (PubMed:11955432, PubMed:12649176, PubMed:14734805). Referências relacionadas: PMID:11955432 PMID:12649176 PMID:14734805
• DNA-PKcs fosforila inúmeros substratos no motivo consenso [ST]-Q, incluindo a histona H2AX no 'Ser-139' para regular a resposta a danos ao DNA (PubMed:14627815, PubMed:16046194), p53/TP53, XRCC4, XRCC5, XRCC6 e AKT1 no 'Ser-473' para promover a sinalização de sobrevivência celular (PubMed:10026262, PubMed:10467406, PubMed:11889123, PubMed:15262962). Referências relacionadas: PMID:14627815 PMID:16046194 PMID:10026262 PMID:10467406 PMID:11889123 PMID:15262962
• Além do reparo de DSBs, DNA-PKcs contribui para a manutenção dos telômeros e previne a fusão de extremidades cromossômicas (Por similaridade).
• Ele também modula a transcrição (PubMed:11955432, PubMed:12649176, PubMed:14734805) e promove a montagem inicial de ribossomos ao processar o rRNA precursor em rRNA 18S maduro no processossomo de pequena subunidade, interagindo com o U3 snoRNA (PubMed:32103174). Referências relacionadas: PMID:11955432 PMID:12649176 PMID:14734805 PMID:32103174
• Na imunidade inata, DNA-PKcs regula a via cGAS-STING ao fosforilar CGAS e PARP1, e faz parte do complexo HDP-RNP que ativa IRF3 (PubMed:28712728, PubMed:33273464, PubMed:35460603). Referências relacionadas: PMID:28712728 PMID:33273464 PMID:35460603
• A proteína está predominantemente localizada no núcleo e nucléolo, com alguma presença no citosol, e está sujeita a múltiplas modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação, acetilação e ubiquitinação.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno compreende os aminoácidos 3993–4128 de DNA-PKcs humano, uma região C-terminal; considere essa localização do epitopo ao combinar com outros anticorpos ou projetar estratégias de detecção.
• Para Western blotting, o alvo tem um peso molecular previsto de 469 kDa; garanta uma porcentagem adequada de gel (por exemplo, 6% de poliacrilamida) e tempos de transferência prolongados para facilitar a transferência eficiente.
• Apesar de ser validado para múltiplas aplicações, as diluições ideais devem ser determinadas empiricamente no sistema experimental do usuário final, começando com os intervalos de concentração recomendados em protocolos padrão.
• A reatividade cruzada é reportada para amostras humanas; para tecidos ou linhas celulares não humanos, realize o alinhamento de sequência entre espécies antes do uso e valide com controles adequados.
• Como DNA-PKcs é uma proteína nuclear, ajuste as etapas de fixação e permeabilização para imunofluorescência ou imuno-histoquímica para garantir acessibilidade adequada ao antígeno.

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