Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-DNA-PKcs para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P78527

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização de DNA-PKcs (subunidade catalítica da protein quinase dependente de DNA)

• DNA-PKcs é a subunidade catalítica do complexo da protein quinase dependente de DNA (DNA-PK), codificada pelo gene PRKDC (também conhecido como HYRC, HYRC1, DNPK1, p460).
• Como sensor molecular para danos ao DNA, DNA-PKcs é essencial para a junção não homóloga de extremidades (NHEJ), a principal via de reparo de quebras de fita dupla (DSBs) e da recombinação V(D)J. Referências relacionadas: PMID:11955432, PMID:12649176, PMID:14734805
• DNA-PKcs requer ligação ao DNA para ativação catalítica; é recrutado para as extremidades do DNA pelo heterodímero Ku70/Ku80 (XRCC6/XRCC5) para proteger e alinhar as extremidades quebradas do DNA e isolar a quebra para a NHEJ. Referências relacionadas: PMID:11955432, PMID:12649176, PMID:14734805
• Além do reparo do DNA, DNA-PKcs atua como proteína de suporte, modulando a transcrição, promovendo a montagem de ribossomos ao processar o rRNA precursor e mantendo a estabilidade telomérica. Referências relacionadas: PMID:11955432, PMID:12649176, PMID:14734805, PMID:32103174
• DNA-PKcs localiza-se principalmente no núcleo e nucleolo, com presença adicional no citosol.
• Como uma serina/treonina quinase que reconhece o consenso [ST]-Q, DNA-PKcs fosforila substratos chave incluindo H2AX (Ser-139) para sinalização de danos ao DNA, AKT (Ser-473) para regulação da via PI3K/AKT, e inúmeros fatores de reparo do DNA (ex: XRCC4, XRCC5, XRCC6). Referências relacionadas: PMID:11955432, PMID:12649176, PMID:14734805, PMID:14627815, PMID:16046194, PMID:15262962

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo sintético que abrange os aminoácidos 3987-4086 do DNA-PKcs humano; é esperada reatividade próxima à região C-terminal da proteína.
• Para Western blot (WB), o peso molecular previsto é de aproximadamente 469 kDa; recomendamos o uso de géis gradiente de SDS-PAGE de baixa porcentagem e tempos de transferência estendidos para garantir o blotting eficiente dessa proteína de grande tamanho.
• Em imuno-histoquímica (IHC-P) e imunofluorescência (IF/ICC), recomendamos a validação dos métodos de recuperação de antígeno e condições de fixação em amostras de tecido ou células relevantes.
• Como um anticorpo policlonal, a consistência entre lotes deve ser confirmada pelo fornecedor; sempre inclua controles positivos e negativos apropriados no seu sistema experimental.

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