Anticorpo Policlonal Anti-DNA polimerase eta para WB - Q9Y253

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da DNA polimerase eta

• A DNA polimerase eta (POLH), também conhecida como RAD30A ou proteína XP-V, é uma DNA polimerase da família Y especializada em síntese de translesão (TLS) através de dímeros de pirimidina ciclobutano induzidos por UV e outras lesões distorcidas. Referências relacionadas: PMID:10385124, PMID:11743006, PMID:16357261
• Coopera com o complexo POLZ (REV3L-REV7-POLD2-POLD3) para estender primers após o desvio da lesão, inserindo um ou dois nucleotídeos opostos ao local danificado. Referências relacionadas: PMID:24449906
• A POLH direciona a DNA polimerase iota (POLI) para focos de replicação, facilitando uma resposta coordenada a danos. Referências relacionadas: PMID:12606586
• Em locais abásicos, a POLH forma uma base de Schiff com fosfato de 5′-desoxirribose, prendendo covalentemente a enzima e inibindo sua síntese de DNA para prevenir mutagênese durante o reparo de excisão de base. Referências relacionadas: PMID:14630940
• A proteína localiza-se no núcleo e é enriquecida nos focos de replicação após danos ao DNA.
• A POLH está sujeita à ubiquitinação, formando ligações isopeptídicas que modulam seu recrutamento e atividade.
• Mutações na POLH são responsáveis pelo Xeroderma pigmentoso variante (XP-V), um distúrbio recessivo marcado por extrema sensibilidade à UV e alto risco de câncer de pele.
• Também desempenha um papel na hipermutação somática de genes de imunoglobulinas, contribuindo para a diversidade de anticorpos. Referências relacionadas: PMID:11376341, PMID:14734526

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde à região central (aa 322–520) da POLH humana, que contém domínios conservados críticos para a atividade da polimerase e desvio de lesões.
• Para Western blot (WB), espere uma banda específica em aproximadamente 78 kDa em lisados nucleares de linhagens celulares humanas, de camundongo ou de rato.
• Para imunofluorescência (IF/ICC), otimize a fixação e a permeabilização para detectar focos nucleares, que aumentam após o tratamento com UV.
• Para ELISA, pré-revestir com a proteína imunógena ou usar uma abordagem de revestimento direto, e considere uma etapa de bloqueio para minimizar o fundo.
• Valide a especificidade do anticorpo em amostras tratadas com knockout ou siRNA para confirmar o reconhecimento do alvo.

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