Anticorpo Monoclonal Anti-DNA Polimerase gama para WB, ELISA - P54098

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da DNA Polimerase gama

• A subunidade gama-1 da DNA polimerase (POLG) é o núcleo catalítico da DNA polimerase mitocondrial, responsável pela replicação de todo o genoma mitocondrial. Ela sintetiza as cadeias pesada e leve usando moldes de DNA de fita simples e iniciadores de RNA, funcionando como um replissomo altamente processivo junto com a helicase TWNK e SSBP1. Referências relacionadas: PMID:11477093, PMID:11897778, PMID:15917273
• A POLG possui uma atividade de exonuclease de prova de leitura 3'→5' que corrige substituições de bases, adições de bases únicas e deleções, garantindo alta fidelidade durante a replicação do mtDNA. Quando ocorre uma incorporação incorreta, a enzima faz a transição para um modo de edição nucleolítica para remover o nucleotídeo errôneo. Referências relacionadas: PMID:10827171, PMID:11477094, PMID:11504725
• Após completar a síntese de mtDNA, a POLG medeia a degradação exonucleolítica 3'→5' na quebra para facilitar a ligação adequada e também exibe atividade de liase 5'-desoxirribose fosfato (dRP), permitindo sua participação na via de reparo por excisão de bases mitocondrial. Referências relacionadas: PMID:9770471, PMID:11477093, PMID:15167897
• Mutações no gene POLG estão ligadas a um espectro de distúrbios mitocondriais, incluindo oftalmoplegia externa progressiva (PEO), neuropatias, epilepsia e síndrome de Leigh. É um gene de doença mitocondrial primário associado a síndromes de depleção e deleção do DNA mitocondrial.
• A proteína se localiza na matriz mitocondrial e é um componente do nucleoide mitocondrial, onde se associa ao mtDNA para facilitar a replicação e manutenção.
• A POLG é uma enzima grande e multifuncional (aproximadamente 140 kDa) que pertence à família de DNA polimerases tipo-A. Requer íons de magnésio para as atividades de polimerase e exonuclease.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno utilizado para gerar este anticorpo corresponde a um peptídeo dentro da região C-terminal (aminoácidos 1140–1239) da POLG humana. Este epítopo situa-se fora dos domínios catalíticos e pode fornecer reconhecimento de formas selvagens e de algumas formas mutantes. No entanto, para cada sistema experimental, verifique a acessibilidade do epítopo em condições nativas e desnaturantes.
• Para Western blot, o peso molecular previsto é de 140 kDa. Use a porcentagem de gel apropriada e condições de transferência para proteínas de alto peso molecular, e inclua um controle positivo, como lisados mitocondriais de células humanas ou de camundongo.
• A reatividade cruzada com a POLG de camundongo foi confirmada, tornando este anticorpo adequado para estudos em modelos de doença mitocondrial em camundongos. Devido à alta conservação da sequência, a reatividade cruzada com outras espécies pode ser possível, mas deve ser validada empiricamente.
• Para ELISA, o anticorpo pode ser usado como reagente de captura ou detecção. Titule o anticorpo para determinar a concentração de trabalho ideal e garanta que o antígeno de revestimento contenha o epítopo C-terminal ou um fragmento recombinante de POLG que abranja a região do imunógeno.
• Observe que a expressão da POLG é ubíqua, mas enriquecida em tecidos com alta demanda energética. Considere validar a sensibilidade de detecção em sistemas de amostras relevantes, como preparações mitocondriais de fígado, músculo ou cérebro.

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