Anticorpo Monoclonal Anti-DNA topoisomerase I (TOP1) para WB, IHC-P, IF/ICC, IP, ELISA - P11387

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da DNA topoisomerase I

• A DNA topoisomerase 1 (TOP1) é uma enzima monomérica codificada pelo gene TOP1 (GeneID: 7150). Também é conhecida como DNA topoisomerase I e é classificada como uma topoisomerase do tipo IB.
• A TOP1 resolve o superenrolamento do DNA e a tensão torsional gerada durante a replicação e transcrição, clivando e religando transitoriamente uma fita da dupla hélice de DNA, permitindo a rotação controlada da fita quebrada em torno da fita intacta (Por similaridade).
• A TOP1 forma um intermediário covalente DNA-(3′-fosfotirosil)-enzima através da transesterificação e, em seguida, religa o DNA após a remoção do superenrolamento; esta atividade é essencial para o metabolismo do DNA.
• Além de seu papel canônico, a TOP1 regula o splicing alternativo do pré-mRNA do fator tecidual (F3) em células endoteliais e está envolvida na transcrição circadiana, modulando a estrutura da cromatina no promotor de BMAL1.
• A proteína se localiza no núcleo, especificamente no nucléolo e no nucleoplasma, consistente com seus papéis na transcrição e replicação do DNA.
• A TOP1 sofre várias modificações pós-traducionais, incluindo acetilação e fosforilação, e é um substrato para conjugação do tipo ubiquitina.
• É expressa em células endoteliais e tem sido implicada em rearranjos cromossômicos e interações hospedeiro-vírus, destacando seu significado biológico e clínico mais amplo.
• O peso molecular calculado é de aproximadamente 91 kDa, o que se alinha com a banda observada no western blot.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O anticorpo foi produzido contra um peptídeo da região N-terminal (aa 1–100); portanto, espera-se que reconheça a TOP1 de comprimento total e também possa detectar variantes da região N-terminal. Verifique a especificidade no sistema experimental relevante.
• A TOP1 é predominantemente nuclear; protocolos eficazes de extração nuclear e fixação/permeabilização (por exemplo, tratamento com Triton X-100) são recomendados para IHC-P e IF/ICC.
• Para WB, use condições redutoras; a banda prevista aparece próximo a 91 kDa. Inclua controles positivos apropriados, como lisados de células HeLa ou endoteliais.
• Este anticorpo monoclonal de coelho oferece alta especificidade e baixo fundo; no entanto, as diluições ótimas do anticorpo devem ser determinadas empiricamente para cada aplicação e tipo de amostra.
• Protocolos de IP e ELISA podem exigir otimização da concentração de anticorpo e condições de incubação; considere fazer a ligação cruzada do anticorpo à resina para IP.

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