Anticorpo policlonal de coelho anti-DNA topoisomerase I (TOP1) para WB, IHC-P, IP, ELISA - P11387

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização da DNA topoisomerase I

• A DNA topoisomerase I (TOP1) é uma enzima codificada pelo gene TOP1, com peso molecular de aproximadamente 91 kDa (UniProt: P11387). Também é conhecida como DNA topoisomerase I.
• A TOP1 alivia o superenrolamento e a tensão torcional do DNA durante a replicação e a transcrição, clivando transitoriamente uma fita de DNA, formando um intermediário covalente, girando a fita livre e, em seguida, religando a quebra.
• Regula o splicing alternativo do pré-mRNA do fator tecidual (F3) em células endoteliais, destacando um papel na expressão gênica relacionada à coagulação.
• A TOP1 contribui para a regulação do ritmo circadiano ao modular a estrutura da cromatina nos elementos de resposta ROR do promotor de BMAL1, influenciando a transcrição dos genes do relógio central.
• A proteína está localizada no núcleo, estando presente tanto no nucléolo quanto no nucleoplasma.
• A TOP1 é expressa em células endoteliais, entre outros tecidos.
• As modificações pós-traducionais incluem acetilação e fosforilação, e a proteína foi implicada como um proto-oncogene em rearranjos cromossômicos.
• É uma fosfoproteína sujeita à ubiquitinação e à formação de ligações isopeptídicas, refletindo um controle regulatório complexo.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno é um peptídeo sintético da região N-terminal (aa 1-100), portanto o anticorpo provavelmente reconhece a proteína de comprimento completo. Para Western blot, espere uma banda próxima de 91 kDa; considere utilizar controles de carregamento adequados e otimizar as condições de bloqueio.
• Para IHC-P, podem ser necessários métodos de recuperação antigênica para expor o epítopo; valide a coloração em tecidos positivos conhecidos, como aqueles ricos em células endoteliais.
• Na imunoprecipitação, verifique a eficiência de captura em lisados celulares relevantes que expressem TOP1 e utilize controles negativos apropriados (por exemplo, IgG).
• Para ELISA, o anticorpo pode ser utilizado como reagente de captura ou detecção; se necessário, combine-o com um anticorpo compatível e valide a sensibilidade com padrões de proteína recombinante.

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