Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-DNMT1 para WB, IHC-P, IP, ELISA - P26358

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da DNMT1

• Identidade Proteica e Isoformas: DNMT1 (DNA (citosina-5)-metiltransferase 1) é uma proteína de dedo de zinco do tipo CXXC, com os apelidos MCMT, CXXC9 e DNA metiltransferase HsaI. Existem múltiplas isoformas; a isoforma 2 é menos expressa do que a isoforma canônica 1.
• Manutenção da Metilação do DNA: Funciona como a principal DNA metiltransferase de manutenção, metilando preferencialmente sítios CpG hemimetilados para preservar os padrões de metilação durante a replicação do DNA. Associa-se a focos de replicação na fase S. Referências relacionadas: PMID:17200670, PMID:21745816, PMID:26070743
• Associação com a Cromatina durante o Ciclo Celular: Além da associação na fase S, a DNMT1 se liga à cromatina durante as fases G2 e M, contribuindo para a manutenção da metilação do DNA independente de replicação. Referências relacionadas: PMID:21745816
• Repressão Transcricional: Media a repressão transcricional por meio de interação direta com HDAC2, e coordena a metilação do DNA com modificações de histonas para regular a expressão gênica. Referências relacionadas: PMID:10888872, PMID:16357870
• Papel Duplo no Silenciamento e Ativação Gênica: Forma complexos de corepressor que promovem a hipermetilação mediada por KRAS e o silenciamento de genes supressores de tumor em células de câncer colorretal; também mantém estados de cromatina repressivos em células-tronco embrionárias. Por outro lado, pode participar da ativação de genes (por exemplo, BAG1) por meio da modulação da dimetilação das histonas H3K4 e H3K9 em complexo com DNMT3B e CTCFL/BORIS. Referências relacionadas: PMID:24623306, PMID:18413740
• Localização Subcelular e Expressão Tecidual: Predominantemente nuclear, associada aos cromossomos. É expressa de forma ubíqua; muito abundante em tecidos fetais, coração, rim, placenta e células mononucleares do sangue periférico, com níveis mais baixos em baço, pulmão, cérebro, intestino delgado, cólon, fígado e músculo esquelético.
• Modificações Pós-traducionais e Associações a Doenças: Está sujeita a acetilação, fosforilação e ubiquitinação. Mutações na DNMT1 estão ligadas à neuropatia sensorial hereditária e à ataxia cerebelar autossômica dominante, surdez e narcolepsia (ADCADN).

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde aos aminoácidos 1–100 do terminal N da DNMT1 humana; considere usar um ensaio de bloqueio com peptídeo para confirmar a especificidade, se necessário.
• Para Western blot, o peso molecular previsto é de ~183 kDa. Use um gel de acrilamida de baixa porcentagem (por exemplo, 6–8%) e otimize as condições de transferência para proteínas de alto peso molecular.
• Em IHC-P, realize a recuperação de antígeno adequada e valide a coloração usando controles teciduais positivos e negativos (por exemplo, coração, placenta ou cólon).
• O anticorpo tem reatividade cruzada registrada para amostras humanas, de camundongo e rato. Ao estender o uso para outras espécies, verifique a reatividade experimentalmente.
• Para imunoprecipitação e ELISA, siga protocolos padrão e inclua controles adequados para contabilizar a possível ligação não específica.

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