Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-Beta-Hidroxilase da Dopamina para WB e ELISA - P09172

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Beta-Hidroxilase da Dopamina

• Identidade da proteína: A beta-hidroxilase da dopamina (DBH), também conhecida como dopamina beta-mono-oxigenase, é codificada pelo gene DBH em humanos e pertence à família das mono-oxigenases dependentes de ascorbato do tipo II e cobre.
• Função principal: A DBH catalisa a hidroxilação da dopamina em noradrenalina (norepinefrina), uma etapa fundamental na via de biossíntese das catecolaminas, regulando assim o equilíbrio dos neurotransmissores.
• Família gênica: A DBH é membro da família das mono-oxigenases; não há parálogos estreitamente relacionados descritos no genoma humano, o que destaca seu papel único na produção de catecolaminas.
• Localização subcelular: A DBH está localizada principalmente no lúmen e na membrana de vesículas secretoras, especialmente nos grânulos cromafins, mas também pode ser secretada no espaço extracelular após a exocitose.
• Modificações pós-traducionais e cofatores: Como glicoproteína, a DBH sofre extensa N-glicosilação, contém pontes dissulfeto essenciais para a estabilidade estrutural e requer íons de cobre e vitamina C (ascorbato) como cofatores para sua atividade oxidorredutase.
• Massa molecular: A massa molecular calculada do precursor não glicosilado é de aproximadamente 69.065 Da, consistente com a banda de aproximadamente 69 kDa observada em SDS-PAGE sob condições redutoras.
• Associações com doenças: Variações genéticas e mutações na DBH foram associadas à hipotensão ortostática e a outras doenças, ressaltando sua relevância clínica (indicada pela palavra-chave "Variante de doença" no UniProtKB).
• Observações adicionais: A DBH também é identificada como uma proteína secretada e uma entrada do proteoma de referência, com sua estrutura 3D determinada e dados de sequenciamento direto de proteínas disponíveis, reforçando sua caracterização bioquímica.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• Aplicação em Western blot: O anticorpo detecta uma banda em torno de 69 kDa em amostras humanas; considere utilizar condições redutoras e validar o sinal em tecidos ou tipos celulares conhecidos por expressar DBH, como a medula adrenal ou neurônios simpáticos.
• Desenho do imunógeno: O fragmento recombinante que abrange os aminoácidos 100–250 corresponde a uma região conservada dentro do domínio catalítico. O anticorpo pode reconhecer tanto a forma luminal madura quanto qualquer precursor associado à membrana, caso esteja presente no lisado.
• Considerações para ELISA: Ao desenvolver imunoensaios do tipo sanduíche, teste a compatibilidade do pareamento com um anticorpo de captura adequado. Considere que a DBH é secretada; portanto, a seleção cuidadosa do tipo de amostra (por exemplo, plasma ou meio condicionado) e as etapas de pré-incubação podem melhorar a detecção.
• Reatividade cruzada: Embora esteja documentado que o anticorpo reage com a DBH humana, a possível reatividade cruzada com outras espécies ou isoformas de DBH deve ser verificada independentemente, especialmente quando se pretendem aplicações quantitativas.
• Preparação da amostra: Devido à dupla localização da DBH nas membranas e nos lúmens vesiculares, podem ser necessárias estratégias de solubilização (por exemplo, detergentes suaves) ou fracionamento subcelular para obter um sinal ideal em ensaios de fase sólida.

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