Anticorpo monoclonal de coelho anti-cadeia intermediária 1 da dineína para WB, ELISA - Q9UI46

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização da cadeia intermediária 1 da dineína

• O gene DNAI1 codifica a cadeia intermediária axonemal 1 da dineína, uma proteína contendo repetições WD que atua como componente estrutural e funcional essencial do complexo do braço externo da dineína em cílios e flagelos móveis.
• Essa proteína é essencial para o movimento ciliar ao longo dos microtúbulos, gerando a força necessária para a depuração mucociliar no trato respiratório e para a motilidade dos espermatozoides.
• Várias isoformas proteicas são produzidas por meio de splicing alternativo, o que pode contribuir para a regulação específica de tecidos da montagem e da função da dineína em diferentes tipos de células ciliadas.
• No nível proteico, o DNAI1 é predominantemente expresso em células epiteliais ciliadas do trato respiratório, em consonância com seu papel na proteção das vias aéreas contra o acúmulo de patógenos e partículas.
• Subcelularmente, o DNAI1 está localizado ao longo de todo o axonema dos cílios e flagelos, ancorado aos microtúbulos duplos externos como parte do complexo motor da dineína.
• Mutações no DNAI1 estão associadas à discinesia ciliar primária (PCD) e à síndrome de Kartagener, doenças caracterizadas por infecções respiratórias crônicas, situs inversus e infertilidade masculina decorrente da imotilidade dos cílios e dos espermatozoides.
• Modificações pós-traducionais, particularmente a fosforilação, regulam a atividade da dineína e a dinâmica axonemal, embora os locais precisos de modificação no DNAI1 ainda não tenham sido completamente mapeados.
• A região N-terminal contém domínios de repetição WD40 que mediam interações proteína-proteína essenciais para a integridade do complexo da dineína e a geração de força motora.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• Para a detecção por Western blot, prepare lisados de linhagens celulares ou tecidos epiteliais ciliados para confirmar a expressão endógena; espera-se uma banda em torno de 79 kDa.
• Utilize condições padrão de SDS-PAGE (por exemplo, gel de 8–10%) e otimize a transferência para proteínas de alto peso molecular, a fim de garantir uma detecção eficiente.
• Como o imunógeno abrange os aminoácidos N-terminais 1–200, o anticorpo pode reconhecer várias isoformas; valide a especificidade utilizando controles de knockdown ou knockout, se disponíveis.
• Para aplicações de ELISA, revesta a placa com o imunógeno recombinante ou a proteína purificada e titule o anticorpo para estabelecer uma concentração de trabalho adequada.
• Como foi relatada reatividade cruzada com camundongo e rato, este anticorpo pode ser considerado para estudos nessas espécies, mas recomenda-se a otimização adequada do protocolo específico para cada espécie.

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