Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-EGFR [Validado por KD] para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P00533

Especificações e Parâmetros Essenciais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do EGFR

• O receptor do fator de crescimento epidérmico (EGFR), também denominado proto-oncogene c-ErbB-1 e receptor tirosina-proteína-quinase erbB-1, é codificado pelo gene EGFR (nomes alternativos: ERBB, ERBB1, HER1).
• Funciona como uma tirosina-quinase receptora que se liga a ligantes da família do EGF (EGF, TGFA, AREG, EPGN, BTC, EREG, HBEGF) para induzir a dimerização e a autofosforilação do receptor, ativando assim importantes vias de sinalização a jusante, incluindo RAS-RAF-MEK-ERK, PI3K-AKT, PLCγ-PKC, STATs e potencialmente NF-κB (PubMed:10805725, PubMed:27153536, PubMed:2790960, PubMed:12297049, PubMed:15611079, PubMed:17909029, PubMed:11116146). Referências relacionadas: PMID:10805725 PMID:27153536 PMID:2790960 PMID:12297049 PMID:15611079 PMID:17909029 PMID:11116146
• Fosforila diretamente efetores a jusante, como RGS16 (aumentando sua atividade GTPase e estabelecendo uma ligação com a sinalização de GPCR) e MUC1 (promovendo interações com SRC e CTNNB1), além de regular positivamente a migração celular por meio da interação com CCDC88A/GIV (PubMed:11602604, PubMed:11483589, PubMed:20462955). Referências relacionadas: PMID:11602604 PMID:11483589 PMID:20462955
• Uma isoforma resultante de splicing alternativo (isoforma 2) pode funcionar como antagonista da sinalização mediada por EGF.
• A localização subcelular inclui a membrana celular, o retículo endoplasmático, o aparelho de Golgi, o núcleo, os endossomos e formas secretadas, refletindo seu tráfego dinâmico e suas funções de sinalização.
• É expressa ubiquamente nos tecidos humanos, sendo a isoforma 2 detectada especialmente em cânceres ovarianos.
• É classificada como proto-oncogene, tirosina-proteína-quinase e glicoproteína transmembrana; também atua como receptor da célula hospedeira para a entrada do vírus da hepatite C (HCV), facilitando a internalização viral.
• As modificações pós-traducionais incluem fosforilação, glicosilação, hidroxilação, metilação, palmitoilação e conjugação semelhante à ubiquitina, conforme indicado pelas palavras-chave do UniProt.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno (aa 1021–1210) está localizado no domínio intracelular C-terminal; portanto, o anticorpo pode detectar tanto a proteína de comprimento completo quanto fragmentos C-terminais. Verifique a especificidade em lisados celulares ou amostras de tecido relevantes.
• Para Western blotting, espera-se uma banda em torno de 134 kDa; no entanto, a glicosilação e a fosforilação podem causar alterações na mobilidade. Inclua marcadores de peso molecular e valide com controles positivos e negativos para EGFR.
• Para IHC-P, os protocolos padrão de recuperação antigênica (por exemplo, tampão de citrato pH 6,0) e bloqueio devem ser otimizados; teste com tecidos positivos conhecidos (por exemplo, pele e placenta) e tecidos negativos (por exemplo, knockout).
• Em IF/ICC, os métodos de fixação (PFA versus metanol) afetam a marcação da membrana do EGFR; recomenda-se a detecção paralela com um marcador de membrana.
• Para ELISA, o anticorpo pode ser utilizado como reagente de captura ou detecção; as condições do ensaio (concentração de revestimento e bloqueio) exigem otimização individual.
• A reatividade cruzada foi relatada para amostras humanas; se utilizado em outras espécies, verifique a reatividade de forma independente devido a possíveis variações de sequência.

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