Anticorpo Policlonal Anti-EIF3J para WB, IF/ICC, ELISA - O75822

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do EIF3J

• Identidade da proteína: EIF3J (Fator de iniciação de tradução eucariótica 3 subunidade J), também conhecido como EIF3S1, eIF3-p35, eIF3-alpha, é codificado pelo gene EIF3J (ID do Gene 8669). É uma subunidade central do complexo eIF3 de cerca de 800 kDa.
• Função central de iniciação da tradução: O EIF3J é um componente do complexo eIF-3 essencial para a síntese proteica eucariótica. O eIF-3 associa-se à subunidade ribossômica 40S e facilita o recrutamento do eIF-1, eIF-1A, eIF-2:GTP:tRNAi-metionil e eIF-5 para formar o complexo de pré-iniciação 43S (43S PIC). Também estimula o recrutamento de mRNA ao 43S PIC e a busca pelo reconhecimento do códon de início AUG. Referências relacionadas: PMID:25849773, PMID:27462815
• Reciclagem de ribossomos: O complexo eIF-3 é necessário para a desmontagem e reciclagem de complexos ribossômicos pós-terminação, prevenindo a união prematura das subunidades 40S–60S antes da iniciação.
• Papel regulador na tradução: O complexo eIF-3 atinge seletivamente e controla a tradução de um subconjunto de mRNAs envolvidos na proliferação celular, diferenciação e apoptose, usando diferentes modos de ligação a haste-laço de RNA para exercer ativação ou repressão traducional. Referências relacionadas: PMID:25849773
• Localização subcelular: Predominantemente citoplasmática, consistente com seu papel na iniciação da tradução em ribossomos citoplasmáticos.
• Modificações pós-traducionais: O EIF3J pode ser acetilado, fosforilado, modificado pela formação de ligações isopeptídicas (ubiquitina-like) e ubiquitinado, conforme evidenciado por estudos de proteômica. Essas modificações podem regular a montagem e a atividade do complexo.
• Splicing alternativo: Existem múltiplas variantes de transcrição para o EIF3J, potencialmente gerando isoformas com funções ou padrões de expressão distintos.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Design do imunógeno: O anticorpo foi produzido contra uma proteína recombinante cobrindo os aminoácidos 1–258 do EIF3J humano. Esta região N-terminal é provavelmente conservada entre espécies, apoiando a reatividade cruzada observada com camundongo e rato. Deve detectar o EIF3J endógeno de comprimento total nas espécies relevantes.
• Western blot (WB): Use lisados celulares totais de amostras humanas, de camundongo ou de rato. O peso molecular previsto é de cerca de 29 kDa. Valide a especificidade incluindo controles de knockdown ou superexpressão e otimize as quantidades de carregamento para evitar saturação.
• Imunofluorescência/ICC: O EIF3J localiza-se no citoplasma; permeabilize as células com um detergente suave (por exemplo, Triton X-100 a 0,1%) e bloqueie com soro apropriado para a espécie hospedeira. Teste diluições do anticorpo começando em 1:50–1:200.
• ELISA: Confirme a ligação usando a proteína recombinante EIF3J ou peptídeo correspondente à sequência do imunógeno. Otimize a concentração de revestimento (geralmente 1–10 µg/mL) e as condições de detecção.
• Manuseio da amostra: Envie em sacos de gelo; upon arrival, armazene alíquotas a -20°C a -80°C. Evite ciclos repetidos de congelamento e descongelamento.

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