Anticorpo monoclonal de coelho anti-eIF4E [Validado por KD] para WB, IF/ICC, IP, ELISA - P06730

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização da eIF4E

• O fator de iniciação da tradução eucariótica 4E (eIF4E), também conhecido como eIF4E1, subunidade de 25 kDa do eIF-4F ou proteína de ligação à capa do mRNA, é codificado pelo gene EIF4E (ID do gene: 1977). Ele desempenha funções duplas no citoplasma, na iniciação da tradução, e no núcleo, na exportação de mRNA (PubMed:11606200, PubMed:22578813, PubMed:22684010).
  Referências relacionadas:
  PMID:11606200, PMID:22578813, PMID:22684010

• A eIF4E reconhece e se liga especificamente à capa de 7-metilguanosina (m7G) na extremidade 5' dos mRNAs, uma etapa crítica que facilita o recrutamento do ribossomo e a desestruturação das estruturas secundárias do mRNA (PubMed:16271312, PubMed:22578813). Juntamente com a EIF4G1, permite a tradução dependente do elemento TISU, contornando a necessidade de varredura ribossômica (PubMed:29987188).
  Referências relacionadas:
  PMID:16271312, PMID:22578813, PMID:29987188

• Além da iniciação, a eIF4E regula a estabilidade e o armazenamento citoplasmáticos do mRNA. Nos corpos P, participa de um complexo que sequestra mRNAs reprimidos translacionalmente, impedindo sua degradação (PubMed:24335285).
  Referências relacionadas:
  PMID:24335285

• A eIF4E facilita a exportação nuclear de um subconjunto de mRNAs, incluindo NOS2/iNOS e MDM2, por meio de interações com o elemento 4ESE e a via de exportação LRPPRC–XPO1, influenciando assim processos como apoptose e progressão do ciclo celular (PubMed:23471078, PubMed:22684010).
  Referências relacionadas:
  PMID:23471078, PMID:22684010

• Subcelularmente, a eIF4E está localizada no citoplasma, nos corpos P, nos grânulos de estresse e também no núcleo (incluindo speckles nucleares e corpos nucleares), refletindo suas funções multifacetadas.

• A eIF4E está sujeita à fosforilação (por exemplo, em Ser209), que modula sua afinidade de ligação à capa e sua atividade de tradução. A acetilação também foi relatada, e a proteína sofre splicing alternativo, gerando isoformas com massas moleculares em torno de 25–29 kDa.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno, um peptídeo sintético que abrange os resíduos 1–100 da eIF4E humana (NP_001959.1), tem como alvo a região N-terminal conservada. Com base na homologia de sequência, é esperada reatividade cruzada com ortólogos de camundongo, rato e macaco, conforme confirmado pelo fornecedor.
• No western blot (WB), espere bandas correspondentes às isoformas de 25 kDa, 27 kDa e 29 kDa; os controles de carregamento e as condições de bloqueio devem ser otimizados para o tipo de amostra.
• Na imunofluorescência (IF/ICC), a eIF4E normalmente apresenta um sinal citoplasmático difuso com marcação nuclear pontilhada; os protocolos de fixação e permeabilização podem precisar de ajustes dependendo da linhagem celular.
• Este anticorpo é validado para imunoprecipitação (IP) e ELISA; para ensaios quantitativos, inclua controles positivos e negativos apropriados.
• Como a eIF4E participa de múltiplos complexos, a IP em condições nativas pode coprecipitar parceiros de interação; condições de lise desnaturantes podem ser utilizadas para isolar a eIF4E total.

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