Anticorpo Policlonal Anti-EP300 para IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q09472

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da EP300

• EP300 codifica a histona acetiltransferase p300, um coativador transcricional multidomínio pertencente à família p300/CBP. A proteína contém um bromodomínio central e um domínio de histona acetiltransferase (HAT).
• A p300 funciona como uma histona acetiltransferase capaz de acetilar todas as quatro histonas centrais nos nucleossomos, marcando epigeneticamente a cromatina para ativação transcricional (PubMed:23415232, PubMed:23934153, PubMed:8945521). Referências relacionadas: PMID:23415232 PMID:23934153 PMID:8945521
• Ela acetila especificamente a histona H3 em Lys-18, Lys-27 e Lys-122, e a histona H4 em Lys-5 e Lys-12. Essas modificações promovem instabilidade do nucleossomo e aumentam a iniciação transcricional (PubMed:21131905, PubMed:23911289, PubMed:23415232, PubMed:37731000). Referências relacionadas: PMID:21131905 PMID:23911289 PMID:23415232 PMID:37731000
• Além das histonas, a p300 acetila numerosos substratos não histonas, incluindo fatores de transcrição (ex: STAT3, FOXO1), enzimas metabólicas (PKM2, PCK1) e proteínas de reparo de DNA, modulando sua atividade, estabilidade e localização (PubMed:15653507, PubMed:15890677, PubMed:24120661, PubMed:24939902). Referências relacionadas: PMID:15653507 PMID:15890677 PMID:24120661 PMID:24939902
• A proteína localiza-se no núcleo, citoplasma e cromossomos, refletindo seus diversos papéis na transcrição, sinalização e manutenção da estrutura da cromatina.
• A p300 participa da regulação do ritmo circadiano associando-se a CLOCK ou NPAS2, levando à acetilação rítmica de histonas em promotores de genes controlados pelo relógio (PubMed:14645221). Referências relacionadas: PMID:14645221
• EP300 está associada a múltiplas doenças: rearranjos cromossômicos e mutações estão ligados a deficiência intelectual (síndrome de Rubinstein-Taybi tipo 2) e vários cânceres. A proteína também interage com proteínas virais, como a E1A do adenovírus e a Tat do HIV-1.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno compreende os 270 aminoácidos N-terminais da EP300 humana, que inclui o domínio TAZ1 envolvido em interações proteína-proteína. Esta região é exclusiva da EP300 e pode reduzir a reatividade cruzada com a proteína CREBBP intimamente relacionada.
• Para imuno-histoquímica (IHC-P) e imunofluorescência (IF/ICC), considere otimizar a recuperação antigênica e a concentração de anticorpo, dada a localização nuclear/citoplasmática da EP300 e seu alto peso molecular (~264 kDa).
• O ELISA pode servir como uma plataforma de detecção quantitativa; valide o ensaio com proteína EP300 recombinante ou lisados celulares que expressem EP300 para garantir a especificidade.
• Como a EP300 é uma proteína grande com múltiplos domínios, as condições de Western blot (WB) desnaturante podem exigir tempos de transferência prolongados e bloqueio cuidadoso para detectar a banda de comprimento total.

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