Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-Epac1/RAPGEF3 para WB, IHC-P, ELISA - O95398

Especificações e Parâmetros Essenciais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização de Epac1/RAPGEF3

• Codificada pelo gene RAPGEF3, a Epac1 (Exchange Protein directly Activated by cAMP 1, proteína de troca diretamente ativada por cAMP 1) é um fator de troca de nucleotídeos de guanina (GEF) regulado por cAMP que ativa especificamente as pequenas GTPases RAP1A e RAP2A.
• Como mediadora essencial da sinalização do cAMP, a Epac1 modula processos fisiológicos, incluindo a angiogênese e o controle dinâmico da função de barreira endotelial por meio de uma via independente de Rho.
• A Epac1 facilita a montagem de um complexo de sinalização envolvendo PDE3B e PIK3R6, o que leva à ativação do complexo PI3K gama, reforçando ainda mais seu papel na sinalização compartimentalizada do cAMP.
• A proteína é essencial para a remodelação do citoesqueleto de actina nas junções célula-célula, incluindo a formação de fibras de estresse e de actina juncional, mantendo assim a integridade endotelial.
• A Epac1 está localizada no sistema de endomembranas e é amplamente expressa nos tecidos, com os níveis mais elevados observados no rim, coração, tireoide e cérebro adultos, bem como no rim fetal.
• Sua atividade é rigorosamente regulada pela ligação direta do cAMP ao seu domínio de ligação a nucleotídeos cíclicos, classificando-a como um fator de troca de nucleotídeos de ligação ao cAMP.
• Foi relatada fosforilação pós-traducional, e o splicing alternativo gera múltiplas isoformas, ampliando sua diversidade funcional.
• As palavras-chave do UniProt incluem: estrutura 3D, angiogênese, cAMP, ligação ao cAMP, fator de liberação de nucleotídeos de guanina, membrana, ligação a nucleotídeos, fosfoproteína, identificação por proteômica, proteoma de referência.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde a um peptídeo C-terminal (aa 824-923) da Epac1 humana; confirme se essa região está presente na isoforma-alvo caso o splicing alternativo seja considerado.
• Dada a expressão robusta e específica dos tecidos, considere o uso de lisados de rim, coração ou cérebro humanos como controles positivos para Western blotting.
• Para imunohistoquímica, valide o anticorpo em cortes fixados em formalina e incluídos em parafina (FFPE), empregando recuperação antigênica, se necessário; inclua tecidos de camundongo e rato como controles de reatividade cruzada.
• Realize diluições seriadas para determinar as concentrações ideais para cada aplicação; as faixas iniciais típicas para anticorpos monoclonais de coelho são de 1:500–1:2000 para WB e de 1:100–1:500 para IHC.
• Ao realizar Western blots, o peso molecular previsto é de aproximadamente 104 kDa; utilize porcentagens apropriadas de gel (por exemplo, SDS-PAGE a 8%) e tempos de transferência prolongados para proteínas de alto peso molecular.

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