Anticorpo Policloonal de Coelho Anti-ERCC8 para WB, ELISA - Q13216

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do ERCC8

• ERCC8 (também conhecido como CSA, CKN1, UVSS2) é uma proteína de reparo de excisão de DNA e um componente de reconhecimento de substrato do complexo CSA.
• O complexo CSA é um complexo E3 ubiquitina-proteína ligase DCX (DDB1-CUL4-X-box) que atua no reparo de excisão de nucleotídeos acoplado à transcrição (TC-NER), removendo rapidamente as lesões que bloqueiam a RNA polimerase II da fita transcrita de genes ativos. Referências relacionadas: PMID:12732143 PMID:16751180 PMID:16964240
• Após o recrutamento para a RNA polimerase II parada pela lesão, o complexo CSA media a ubiquitinação da subunidade Pol II POLR2A/RPB1 na Lys-1268, uma etapa crítica que governa a estabilidade da RNA Pol II e inicia a excisão do dano por meio do recrutamento do TFIIH. Referências relacionadas: PMID:12732143 PMID:16751180 PMID:16964240
• O complexo CSA também promove a ubiquitinação e degradação proteassômica do ERCC6/CSB de maneira dependente de UV, essencial para a recuperação da síntese de RNA após o reparo. Referências relacionadas: PMID:16751180
• O ERCC8 participa do reparo de quebras duplas do DNA (DSB) por junção não homóloga de extremidades (NHEJ). Referências relacionadas: PMID:29545921
• O ERCC8 se localiza no núcleo, especificamente nos cromossomos e na matriz nuclear.
• Como proteína de repetição WD, o ERCC8 contém vários domínios WD40, e mutações estão associadas à síndrome de Cockayne, uma desordem caracterizada por nanismo, surdez e fotossensibilidade.
• O ERCC8 sofre splicing alternativo, é uma fosfoproteína e está sujeito a modificações pós-traducionais.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno utilizado é um peptídeo sintético correspondente à região C-terminal (aa 300-396) do ERCC8 humano. Esse design pode aumentar a especificidade pela proteína alvo.
• Para Western blotting (WB), valide o anticorpo usando controles positivos e negativos adequados. Detecte o ERCC8 endógeno em lisados de células humanas e de camundongo no peso molecular previsto de 44 kDa.
• Para ELISA, otimize a diluição do antígeno de revestimento e do anticorpo para obter a sensibilidade adequada. Utilize em conjunto com um sistema de detecção compatível.
• Se for observado sinal fraco ou ausência de sinal, considere testar diferentes tampões de bloqueio, tempos de incubação do anticorpo ou métodos de preparação do lisado. A recuperação de epítopos induzida por calor geralmente não é necessária para Western blotting.

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