Anticorpo policlonal de coelho anti-ERK2 para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P28482

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização da ERK2

• A ERK2 (MAPK1) é uma quinase de serina/treonina e um componente essencial da cascata de sinalização MAPK/ERK, atuando juntamente com a ERK1 (MAPK3) para regular diversos processos celulares, incluindo crescimento, adesão, sobrevivência e diferenciação, por meio da fosforilação de mais de 160 substratos. Referências relacionadas: PMID:35831023
• A quinase fosforila uma ampla variedade de alvos citoplasmáticos, nucleares e organelares — como fatores de transcrição (ATF2, ELK1, FOS), proteínas do citoesqueleto (MAP2, CTTN), reguladores da apoptose (BAD, MCL1) e controladores da tradução (EIF4EBP1) — orquestrando assim a expressão gênica, a dinâmica do citoesqueleto e a apoptose.
• Em condições de hipóxia, a ERK2 fosforila a PGK1 nas mitocôndrias para suprimir a formação de acetil-coenzima A a partir do piruvato (PubMed:26942675). Referências relacionadas: PMID:26942675
• A ERK2 também atua como repressora transcricional, ligando-se às sequências consenso [GC]AAA[GC] para reduzir a expressão de genes induzidos por interferon gama, como CCL5, IRF7 e OAS1, independentemente de sua atividade quinase.
• A localização subcelular depende do contexto: a ERK2 é encontrada no citoplasma, associada ao citoesqueleto e ao fuso, no núcleo, nos centrossomos, nas cavéolas da membrana e nas adesões focais, refletindo seus diversos papéis na sinalização.
• As principais modificações pós-traducionais incluem fosforilação (motivo TEY da alça de ativação), acetilação e ubiquitinação, com implicações para a duração do sinal e a localização celular. É classificada nas categorias: quinase, proteína-quinase de serina/treonina, fosfoproteína, acetilação, conjugação de ubiquitina, entre outras.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• Para Western blotting, o peso molecular previsto é de 41 kDa; considere utilizar lisados de células inteiras de HeLa, HEK293 ou Jurkat como controles positivos, pois a ERK2 é expressa ubiquamente.
• Na imuno-histoquímica (IHC-P), teste uma variedade de métodos de recuperação antigênica e diluições do anticorpo, pois a localização da ERK2 é tanto nuclear quanto citoplasmática; cortes de tecidos normais e tumorais adequados devem ser validados.
• Para imunofluorescência (IF/ICC), condições ideais de fixação e permeabilização preservarão os sinais da ERK2 tanto no núcleo quanto no citoesqueleto; considere a coloração simultânea com marcadores específicos de compartimentos.
• A aplicação em ELISA pode ser adaptada para detecção quantitativa; associe-a a um anticorpo de captura de ERK2 e valide-a em proteína recombinante e matrizes de amostras nativas.
• O imunógeno está localizado entre os resíduos 200–300, uma região distinta do motivo regulatório TEY; este anticorpo pode reconhecer tanto a ERK2 fosforilada quanto a não fosforilada — valide o comportamento dependente de fosforilação, se necessário.
• Como este é um anticorpo policlonal, a consistência entre lotes deve ser verificada em cada aplicação; a validação por KO, quando disponível, apoia a especificidade para o alvo.

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