Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-Fas para WB, ELISA - P25445

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do Fas

• O Fas, também conhecido como CD95, APO-1 e TNFRSF6, é um membro da superfamília dos receptores do fator de necrose tumoral e um mediador crítico da apoptose.
• Ele funciona como receptor para o FASLG (ligante do Fas), formando o complexo de sinalização indutor de morte (DISC) por meio do recrutamento de FADD, que ativa a caspase-8 e a cascata de caspases a jusante para executar a apoptose.
• A isoforma 1 de comprimento total (ligada à membrana) desencadeia a apoptose, enquanto as isoformas secretadas 2–6 produzidas por splicing alternativo atuam como receptores iscas que bloqueiam a apoptose mediada por FASLG in vitro.
• O Fas está localizado principalmente na membrana celular, incluindo as microdomínios de membrana (rafts), mas isoformas secretadas também são detectadas no meio extracelular.
• As principais modificações pós-traducionais incluem glicosilação, palmitoilação e fosforilação, que regulam o tráfego membranar e a sinalização da proteína.
• Em células mononucleares de sangue periférico (PBMCs) em repouso, a isoforma 1 e a isoforma 6 são expressas em níveis iguais; após a ativação, a isoforma 1 aumenta enquanto a isoforma 6 diminui, sugerindo uma mudança regulatória.
• A apoptose mediada por Fas é essencial para a tolerância periférica e a morte celular induzida por ativação de linfócitos T maduros, destacando seu papel na homeostase imunológica.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde aos aminoácidos 200–300 do domínio extracelular do Fas humano. Esta região é conservada entre humano, camundongo e rato, o que suporta a reatividade cruzada.
• Para Western blotting, múltiplas bandas entre 9–38 kDa podem ser observadas devido ao splicing alternativo, glicosilação e perda de domínios da membrana. Valide a especificidade das bandas usando controles adequados.
• Ao realizar o ELISA, considere usar o fragmento recombinante de Fas como controle positivo e pré-incubar o anticorpo com o imunógeno para confirmar a especificidade.
• Para estudos envolvendo ativação de células imunológicas, observe que a expressão das isoformas de Fas muda após o estímulo, portanto o tempo de coleta e o tipo celular são críticos para a detecção.

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