Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-FCN1 para WB e ELISA - O00602

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Ficolina-1

• A Ficolina-1 (também conhecida como M-ficolina, ficolina-A, ficolina-alfa) é uma lectina do tipo colágeno secretada de 35 kDa codificada pelo gene FCN1 (GeneID: 2219), pertencente à família de ficolinas de moléculas de reconhecimento de padrões.
• Atua como um receptor de reconhecimento de padrões que se liga a estruturas específicas de carboidratos na superfície de patógenos para iniciar a via do complemento das lectinas através da ativação da serina protease MASP1, levando à fagocitose de patógenos e sinalização imune adaptativa. Referências relacionadas: PMID:16116205, PMID:17897951, PMID:20032467
• Reconhece preferencialmente derivados de ácido siálico ligados 2-6 acetilados em 9-O e glicanos contendo ácido siálico com ligações 2-3. Referências relacionadas: PMID:20032467, PMID:20400674
• Também pode ativar monócitos através do receptor acoplado à proteína G FFAR2, induzindo a secreção de interleucina-8/IL-8. Referências relacionadas: PMID:21037097
• Localiza-se como uma proteína secretada e ancorada na superfície celular de células imunes.
• Expressa em leucócitos de sangue periférico, monócitos e granulócitos; também detectada no baço, pulmão e timo (atribuído a macrófagos teciduais). Não encontrada em linfócitos.
• Contém uma região do tipo colágeno e um domínio de lectina do tipo fibrinogênio; a ligação dependente de cálcio e a formação de ligações dissulfeto contribuem para sua oligomerização e integridade estrutural (estrutura 3D resolvida; identificação por proteômica; proteoma de referência; peptídeo sinal).

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno abrange os aminoácidos 30–326, cobrindo quase todo o comprimento do FCN1; espera-se que o anticorpo policlonal resultante tenha como alvo múltiplos epítopos, fornecendo um sinal robusto tanto em condições desnaturantes (WB) quanto nativas (ELISA).
• Para Western blot, reduza as amostras com DTT/β-mercaptoetanol para detectar a forma monomérica de 35 kDa; note que oligômeros ligados por dissulfeto podem aparecer em massas moleculares mais altas em condições não redutoras.
• Valide a especificidade em amostras conhecidas por expressar FCN1 (por exemplo, células mononucleares de sangue periférico humano, linhagens monocíticas U937 ou THP-1) e use um controle negativo (linfócitos ou knockdown) para confirmar a banda de interesse.
• Na ELISA, realize titulações em xadrez usando ficolina-1 recombinante ou soro para otimizar as concentrações do anticorpo de captura e detecção; considere testar o anticorpo como componente de captura e detecção.
• Ao usar com amostras de camundongo ou rato, verifique a reatividade com controles positivos específicos da espécie, pois a homologia da sequência é de ~80%, mas o reconhecimento do epítopo pode variar.
• Colete sangue e prepare soro/plasma sob condições que evitem a ativação não intencional do complemento para evitar o consumo de proteína ou a formação de complexos.
• A consistência entre lotes pode diferir entre anticorpos policlonais; solicite amostras de retenção ou realize um estudo de ponte (bridging study) ao alternar entre lotes para ensaios críticos.

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