Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-FTO para WB, IHC-P, IF/ICC, IP, ELISA - Q9C0B1

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da FTO

• A FTO (proteína associada à massa gorda e obesidade) é uma dioxigenase dependente de alfa-cetoglutarato que atua como desmetilase de RNA. Também conhecida como ALKBH9, pertence à família AlkB de dioxigenases.
• Ela media a desmetilação oxidativa da N6-metiladenosina (m6A) no mRNA, a modificação interna mais prevalente em eucariotos superiores, regulando assim a expressão e a estabilidade do mRNA. Referências relacionadas: PMID:22002720, PMID:25452335, PMID:26457839, PMID:30197295
• A FTO também desmetila a N6,2'-O-dimetiladenosina (m6Am) nas capas do mRNA, afetando a estabilidade do mRNA ao promover a descapagem, e atua sobre a m6A do snRNA U6. Referências relacionadas: PMID:28002401, PMID:30197295
• Ela funciona como desmetilase de tRNA ao remover a N1-metiladenina e tem baixa atividade no reparo de DNA/RNA alquilados, embora seu papel in vivo no reparo de DNA seja incerto. Referências relacionadas: PMID:30197295, PMID:18775698, PMID:20376003
• A localização subcelular é principalmente nuclear, com presença em speckles nucleares e citoplasma.
• A FTO é expressa de forma ubíqua, com alta expressão nas glândulas adrenais, cérebro (hipotálamo e hipófise), e está superexpressa em certas leucemias mieloides agudas com alterações genéticas específicas. Referências relacionadas: PMID:17434869, PMID:17496892, PMID:28017614
• As modificações pós-traducionais incluem acetilação, fosforilação e conjugação do tipo ubiquitina, que podem regular sua atividade e estabilidade.
• Ela desempenha um papel crucial na regulação da massa gorda, adipogênese, peso corporal e homeostase energética, além de estar envolvida na termogênese e na diferenciação de adipócitos. Referências relacionadas: PMID:18775698, PMID:20376003, PMID:26287746
• Papel oncogênico na leucemia mieloide aguda ao desmetilar m6A em transcritos de oncogenes como MYC, CEBPA, ASB2 e RARA, promovendo sua expressão. Referências relacionadas: PMID:28017614, PMID:29249359

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo da região N-terminal (aa 1-100), que pode detectar a FTO de comprimento total e possivelmente algumas isoformas. Inclua controles positivos e negativos (por exemplo, lisados com superexpressão de FTO ou amostras tratadas com siRNA) para confirmar a especificidade.
• Para Western blot (WB), execute amostras de proteínas reduzidas e desnaturadas; o tamanho esperado da banda é de ~58 kDa. Use controles de carregamento e condições de bloqueio adequadas.
• Em IHC-P e IF/ICC, teste diferentes métodos de fixação e recuperação de antígeno. Seções parafinadas podem exigir recuperação de epítopo induzida por calor. Valide a coloração usando tecidos positivos conhecidos (cérebro, adrenal) e inclua controles de isotipo.
• Para imunoprecipitação (IP), o anticorpo pode ser adequado para capturar complexos nativos de FTO. Otimize as condições do tampão de lise e a quantidade de anticorpo para a quantidade total de proteína do seu experimento.
• Para ELISA, o anticorpo pode ser utilizado nos formatos direto e sanduíche; otimize as condições de revestimento e detecção de acordo com os requisitos específicos do seu ensaio.

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