Anticorpo Policlonico de Coelho Anti-GOT2 para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P00505

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do GOT2

• GOT2, também conhecido como aspartato aminotransferase mitocondrial, quinurenina aminotransferase 4 (KAT4) ou proteína ligadora de ácidos graxos associada à membrana plasmática (FABPpm), é codificado pelo gene GOT2 em humanos. Pertence à família das aminotransferases dependentes de piridoxal fosfato de classe I.
• Como enzima chave do shuttlemalato-aspartato, GOT2 é essencial para manter o balanço redox do NAD(H) intracelular, facilitando a transferência de equivalentes redutores através da membrana mitocondrial.
• GOT2 catalisa a transaminação irreversível da L-quinurenina para ácido quinurênico (KA), um metabólito neuroativo, ligando-o à modulação da via da quinurenina e a processos neurológicos.
• A enzima também desempenha papel na captação celular de ácidos graxos de cadeia longa por sua identidade como FABPpm na membrana plasmática, contribuindo para o transporte lipídico.
• GOT2 é localizado principalmente na matriz mitocondrial; no entanto, uma fração também é detectada na membrana celular, compatível com suas funções duplas no metabolismo mitocondrial e na captação de ácidos graxos.
• Modificações pós-traducionais incluem acetilação, metilação, nitração e fosforilação, que podem regular sua atividade e distribuição subcelular. A proteína é sintetizada com um peptídeo de trânsito mitocondrial que é clivado para gerar a forma madura.
• Mutações no GOT2 estão associadas à encefalopatia epiléptica e do desenvolvimento 82 (DEE82), destacando seu papel crítico no metabolismo cerebral.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde aos resíduos 30–200 do GOT2 humano, uma região que inclui o segmento N-terminal da proteína mitocondrial madura após a clivagem do peptídeo de trânsito. Esse desenho pode favorecer o reconhecimento da forma endógena processada nas mitocôndrias.
• Para aplicações de Western blot, considere enriquecer as frações mitocondriais para melhorar a relação sinal-ruído, já que GOT2 é predominantemente mitocondrial. O peso molecular previsto do precursor é de ~47,5 kDa, enquanto a proteína madura migra próxima a 48 kDa.
• Em imunohistoquímica (IHC-P) e imunofluorescência (IF/ICC), valide a detecção em tecidos ou células com alta atividade metabólica (por exemplo, fígado, coração, cérebro), onde a expressão de GOT2 é abundante. Otimize as etapas de permeabilização e recuperação de antígeno para garantir o acesso aos epítopos mitocondriais.
• Para ELISA, use GOT2 recombinante ou lisados de tecido como padrão para estabelecer a sensibilidade e especificidade do ensaio. A reatividade cruzada com GOT2 de camundongo e rato foi observada, tornando o anticorpo adequado para modelos translacionais.

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