Anti-GSDMD (Comprimento total + Terminal C) Anticorpo Monoclonal de Coelho para WB, ELISA - P57764

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do GSDMD

• A Gasdermina-D (GSDMD) é um membro da família das gasderminas e serve como precursor de uma proteína formadora de poros crítica para a piroptose e defesa do hospedeiro. Referências relacionadas: PMID:26375003, PMID:26375259, PMID:27281216
• Após clivagem por caspases inflamatórias (CASP1/4/5), o fragmento N-terminal transloca para a membrana plasmática, liga-se a lípidos do folheto interno, como fosfatidilinositol fosfatos, e oligomeriza para formar poros de 10-15 nm, libertando IL-1β e IL-18 e desencadeando a piroptose. Referências relacionadas: PMID:27281216, PMID:27418190, PMID:29898893
• Os poros de GSDMD também medeiam a permeabilização da membrana mitocondrial, levando à libertação de mtDNA, e o fragmento N-terminal exibe atividade bactericida direta contra bactérias Gram-negativas e Gram-positivas. Referências relacionadas: PMID:27281216
• No intestino delgado, um fragmento clivado por CASP3/7 atua como coativador de transcrição para STAT1, promovendo a expressão de CIITA e MHC de classe II para manter a tolerância alimentar.
• O GSDMD é expresso em células em diferenciação do esófago e estômago, e a sua ativação em células endoteliais cerebrais pode causar a rutura da barreira hematoencefálica durante a piroptose excessiva.
• As modificações pós-traducionais incluem palmitoilização, fosforilação e ubiquitinação, e pertence à família das gasderminas caracterizada por um domínio N-terminal formador de poros conservado.
• A clivagem pelo alergénio papaína gera um fragmento formador de poros que liberta especificamente IL-33, impulsionando a inflamação do tipo 2. Referências relacionadas: PMID:35794369

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunogénio (aa 346-484) corresponde à porção C-terminal; portanto, este anticorpo pode reconhecer tanto o GSDMD de comprimento total como o fragmento C-terminal clivado. Para Western blot, considere validar a deteção da proteína endógena em condições de ativação do inflamassomo para distinguir as espécies clivadas.
• Uma banda em aproximadamente 53 kDa representa o GSDMD de comprimento total; a clivagem liberta o domínio formador de poros N-terminal (~31 kDa) e o fragmento C-terminal (~22 kDa). Use controlos apropriados (por exemplo, macrófagos tratados com LPS+ATP) para confirmar a especificidade.
• Para ELISA, o anticorpo pode ser adequado como reagente de captura ou deteção. Considere emparelhar com um anticorpo específico N-terminal para quantificar diferencialmente o GSDMD de comprimento total versus o clivado. Otimize as condições de revestimento e bloqueio empiricamente.
• Uma vez que o GSDMD forma poros oligoméricos, a solubilidade e conformação podem variar entre os tipos de amostras; inclua detergentes suaves e sonicicação nos tampões de lise para extração eficiente.

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